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抗生素(antibiotics)作为最广泛应用的抗细菌药物，目前被广泛应用于水产养殖业中，但超量、滥用抗生素造成了水产品药物残留超标等一系列问题，如何控制抗生素的过量应用是亟待解决的重要科学与生产问题，因此寻找抗生素的有效替代品是目前国内外本领域的研究热点之一。抗菌肽(antimicrobial peptide)是先天性免疫中的重要免疫活性因子，具有广谱的抗菌性，且不会产生耐药性，在所有替代抗生素的选择中，抗菌肽被认为是普遍存在于各种生物中由基因编码的“天然抗生素”，是抗生素的最佳替代品之一，具有广阔的应用前景。抗生素是迄今为止已知的对各种病原微生物抑杀效果最有效的化学合成物质，尚未发现任何一种活性物质能够完全替代抗生素，因此在实际生产中采取降低抗生素的用量，从而使水产品中抗生素的残留量符合国内外安全标准，也是解决抗生素污染的重要途径。本研究利用体外合成的抗菌肽Sphistin和基因工程表达产物Scygonadin2，通过与3种不同的抗生素联合试验，评价Sphistin和Scygonadin2与抗生素的协同抑杀菌效果，为探索抗菌肽在水产养殖上的应用开发奠定基础。主要研究成果如下: 1.Scygonadin2基因在毕赤酵母中的表达及抗菌活性:构建了pPIC9K-Scygonadin2真核表达载体，转化入毕赤酵母GS115中进行真核表达，对表达获得的抗菌肽进行亲和层析纯化后，进行抗菌实验。抗菌实验结果表明，真核表达的抗菌肽Scygonadin2对革兰氏阳性菌具有较好的抑杀活性，对被测的革兰氏阴性菌无抑杀活性(＞50μM)。 2.N-末端的组成差异对Scygonadin2的抗菌活性的影响:分别构建pPIC9K-Scygonadin2载体和pPIC9K-Kex2-Scygonadin2载体，将载体分别转化入毕赤酵母GS115中进行真核表达，对表达获得的蛋白纯化后进行N-末端测序，测序结果表明，由GS115/pPIC9K-Kex2-Scygonadin2的毕赤酵母菌株表达获得的抗菌肽，其N-末端与天然蛋白的N-末端氨基酸序列相同，无多余氨基酸。由GS115/pPIC9K-Scygonadin2的毕赤酵母菌株表达获得抗菌肽，其N-末端存在限制性酶切位点导致的多余氨基酸残基Tyr-Val-Glu-Phe。对两种N-末端组成存在差异的Scygonadin2分别进行抗菌实验，发现两种不同N-末端的Scygonadin2对细菌的抑杀效果基本相同，不存在显著性差异，表明N-末端的组成差异对Scygonadin2的抗菌活性并未产生显著性地影响，该实验为体外表达具有天然活性的抗菌肽奠定了理论基础。 3.拟穴青蟹阴离子抗菌肽Scygonadin2同抗生素的协同抗菌效果:将纯化后的抗菌肽Scygonadin2同青霉素、链霉素和四环素等抗生素进行协同抗菌实验，结果表明，Scygonadin2与四环素协同使用时，对荧光假单胞菌的抑杀存在协同作用(FICI=0.266)，Scygonadin2与青霉素对施氏假单胞菌的抑杀有增强作用(FICI=0.508)。 4.拟穴青蟹阳离子抗菌肽Sphistin同抗生素的协同抗菌效果:将体外合成的抗菌肽Sphistin同青霉素和链霉素等抗生素进行协同抗菌实验，结果表明，抗菌肽Sphistin与青霉素以及链霉素针对大肠杆菌模式菌株的抑杀均具有增强作用（FICI分别为0.531，0.625）。