本文以鸡屠宰副产物(包括鸡骨、鸡内脏等)为主要原料,大豆粕为辅料,分别利用游离酶水解和共固定化酶水解两种方法制备蛋白胨。内容主要包括采用正己烷对原料脱脂以及超声波辅助碱法提取混合蛋白工艺的优化;蛋白酶的筛选及共固定化,利用单因素结合二次通用旋转组合设计制备蛋白胨;通过理化功能特性及微生物学试验对自制蛋白胨产品进行检测和验证,旨在为今后深入研究鸡副产物为原料制备蛋白胨培养基提供试验依据及有益的探索。首先,采用正己烷对鸡副产物脱脂,分别以残留脂肪含量及总蛋白含量为考察指标,通过单因素结合响应面分析法优化脱脂工艺,得到两个拟合性良好的试验模型,最终确定鸡副产物脱脂最佳工艺参数为:液固比4:1(m L/g),脱脂温度50℃,脱脂时间9h。在该条件下所得脱脂后的残留脂肪含量实测值为2.09%,所得总蛋白含量实测值为45.67%。其次,以鸡副产物和大豆粕为原料,采用超声波辅助碱法提取混合蛋白。以蛋白提取率为考察指标,采用Plackett-Burman设计结合响应面分析筛选出显著性因素,初步确定各因素的爬坡方向,得到最优工艺:原料干重比3:1(g/g)、过筛目数80目、碱液浓度0.70g/100m L、液固比15:1(m L/g)、超声功率365W、提取温度42℃、提取时间2h、提取次数2次。该条件下经过三次平行测定,所得蛋白提取率实测值为54.63%。测得CBSM混合蛋白的等电点(PI)为4.0,提取后蛋白含量为62.64%。再次,以水解度及蛋白胨得率为考察指标,对胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶五种酶进行筛选,选用水解效果较好、条件差异较小的胰蛋白酶和碱性蛋白酶进行复合水解制备蛋白胨。通过四元二次通用旋转组合设计进行工艺优化,得到各因素最优水平为:双酶配比1.3:1(g:g)、酶解温度54℃、酶解p H8.2、酶解时间3.4h,该条件下所得蛋白胨得率实测值为29.28%,制得游离酶蛋白胨。之后,以壳聚糖和海藻酸钠为载体,分别采用交联-吸附-交联法和交联-包埋-交联法,进行胰蛋白酶和碱性蛋白酶的共固定化。以固定化率和固定化酶活回收率为指标,采用单因素和正交试验确定出海藻酸钠为载体时固定化效果较好,并分析共固定化酶性质;以蛋白胨得率为考察指标,采用四元二次通用旋转组合设计优化共固定化酶水解制备蛋白胨工艺,确定最优条件为:固定化酶加酶量10%、酶解温度62℃、酶解p H9.5、酶解时间2.5h,该条件下所得蛋白胨得率实测值为32.14%,制得共固定化酶蛋白胨。最后,对两种自制蛋白胨理化功能特性进行分析,并与市售蛋白胨效果对比,发现两种自制蛋白胨均可达到市售蛋白胨质量标准,可配制成培养基进行微生物的培养;将两种自制蛋白胨配制培养基,进行大肠杆菌O157和枯草芽孢杆菌生长曲线的测定,并计算在不同接种量下的代时,发现共固定化酶蛋白胨配制的培养基更适合于两种菌的生长;对两种自制蛋白胨进行微生物学试验测定,包括硫化氢试验、靛基质试验及V-P试验,试验结果均符合微生物学试验标准,产品合格,营养价值较为丰富,可替代市售蛋白胨加以利用。