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原发性肝细胞癌(HCC)是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤之一，据统计全世界每年新发病例数超过50万，其中我国占20％，其死亡率在我国恶性肿瘤中居第二位。HCC的发生是多基因突变、多因素、多途径的过程。其中信号传导在肿瘤形成过程中的作用正在逐步被阐明，信号传导通路已成为抗肿瘤药物研究的新靶点。近年来,肝癌前病变期的特殊病理改变逐渐引起了国内外学者的注意，发现此阶段虽然细胞形态尚未发生明显改变，但已出现一些酶学及蛋白表达异常，这些细胞在某些因素持续作用下可发生癌变，故深入研究此阶段的病理机制，为早期干预逆转这种初始病变、阻断肝癌形成提供了理论依据。本研究应用酶组织化学、免疫组织化学、免疫细胞化学等技术研究了大鼠肝癌前病变的病理改变及Wnt信号通路的变化，同时应用血清药理学方法，探讨了苦参碱诱导大鼠肝卵圆细胞WB-F 344细胞向成熟肝细胞定向分化的作用，推测此作用可能是通过调节Wnt信号通路实现的。
第一部分苦参碱对大鼠肝癌前病变的阻断作用及对Wnt信号通路的影响
目的：观察大鼠肝癌前病变的形态学、酶学、蛋白表达的改变，了解肝癌前病变期的基本病理改变以及苦参碱阻断肝癌前病变过程中Wnt信号通路的作用。
方法：
1.肝癌前病变模型的建立：60只大鼠随机分为3组：A：模型组；B：苦参碱组；C：正常对照组。A、B组采用腹腔注射二乙基亚硝胺(DEN)+含0.015％二乙酰氨基芴(2-AAF)饲料饲养+2/3肝切除方法复制大鼠肝癌前病变模型，B组给予苦参碱灌胃，7周末实验结束。
2.应用苏木素-伊红(HE)染色观察各实验组大鼠肝组织形态学改变；酶组织化学观察各组肝组织γ-谷氨酰转肽酶(γ-GTase)、三磷酸腺苷酶(ATPase)分布及定量比较；免疫组织化学观察各组Thy-1(CD90)、白蛋白(ALB)、甲胎球蛋白(AFP)、Wnt-1蛋白，轴蛋白(Axin)，β链蛋白(β-catenin)分布及定量比较。
结果：
1.肝脏癌前病变模型组织HE染色：7周末A组模型组大鼠肝小叶结构消失，汇管区小胆管增生，沿小胆管外侧可见卵圆细胞大量增生，有的卵圆细胞以汇管区为中心向肝实质内爬伸样生长，破坏邻近肝板；B组肝小叶结构存在，可见少量变异肝细胞，卵圆细胞增生较少。
2.酶组化染色：γ-GTase:A组可见多处位于汇管区周围或肝小叶内鲜艳的椭圆形玫瑰红色阳性反应灶。B组病灶着色明显较淡，病灶范围小，A、B组单位面积内病灶面积为(mm2/cm2)：8.24±0.53、3.25±0.47，B组有显著抑制γ-GT酶变灶的作用(P<0.01)。ATPase：A组均可见到位于肝小叶内的椭圆形阴性反应灶，B组病灶范围均缩小。
3.免疫组化染色：C组中Thy-1、AFP蛋白表达阴性，A组AFP蛋白在汇管区或肝小叶内高表达，B组表达下调；ALB在C组肝组织中弥漫性均匀表达，在A组中表达明显减少，B组表达上调，B组、C组与A组比较有显著差异。Wnt-1、β-catenin在C组中肝组织细胞膜及胞浆内均匀一致少量表达，A组可见汇管区周边及肝小叶内增生灶中强阳性表达，经B组苦参碱干预后阳性区域的面积及着色深度均有不同程度减少；Axin在C组中肝细胞膜及胞浆内呈阳性表达，部分细胞核表达，A组表达减弱，病灶区表达阴性，B组苦参碱干预后阳性区域的面积及着色深度均有不同程度增高；B组、C组与A组比较有显著差异。
结论：
1.大鼠肝癌前病变阶段以卵圆细胞大量增生为特征性改变，病灶内γ-GTase、ATPase、Thy-1、AFP表达较强，苦参碱可减轻上述病变，诱导ALB表达。
2.苦参碱具有诱导肝癌前病变中卵圆细胞向成熟肝细胞发育分化的作用，而此作用与下调Wnt信号通路的活性有关。
第二部分 苦参碱对大鼠肝卵贺细胞WB－F344细胞增殖及对Wnt信号通路的调控作用
目的：了解体外培养的大鼠肝卵圆细胞株WB-F 344细胞中Wnt信号的表达情况及苦参碱对WB-F 344细胞表达Wnt信号分子的调节作用，探讨苦参碱对该细胞分化的影响。
方法：
1.肝卵圆细胞的培养与药物干预：无菌培养WB-F 344细胞，应用MTT法检测苦参碱对WB-F 344细胞株增殖影响，并应用经典诱导剂丁酸钠作为对照。
2.免疫细胞化学方法检测苦参碱、丁酸钠对WB-F 344细胞表达AFP、ALB、Wnt-1、Axin、β-catenin的影响。
结果：
1.苦参碱和丁酸钠处理后卵圆细胞变大，核浆比减小，双核细胞增多，随着用药浓度和时间的增加，变化越明显。
2.免疫细胞化学检测结果：空白对照组：AFP、Wnt-1、Axin、β-catenin表达阳性，ALB表达阴性；苦参碱组和丁酸钠组：AFP、Wnt-1、β-catenin表达明显减弱，Axin表达增强，并且出现ALB的阳性表达。苦参碱组和丁酸钠组与空白对照组比较有显著性差异，苦参碱组和丁酸钠组之间比较无显著差别。
结论：
1.苦参碱可抑制WB-F 344细胞增殖，且此抑制作用存在时间、剂量依赖性。
2.苦参碱可诱导细胞向成熟肝细胞方向分化，此分化过程与下调Wnt信号通路的作用有关。