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背景和目的:肿瘤侵袭和转移是癌症患者死亡的重要原因之一,而肿瘤血管生成则是肿瘤生长和转移的基础。因此,抗血管生成治疗成为目前肿瘤治疗研究领域的一个热点。靶向给药系统能将药物定向输送到治疗部位,提高治疗部位的药物浓度,减少药物用量,降低不良反应,提高了药物的安全性和有效性。在超声作用下,含有气体的脂质微泡产生空化作用,微泡发生内爆产生的能量可引起声孔效应,即大分子可以在短时间内进入细胞并被细胞俘获。这种利用脂质微泡作为递送载体的方法具有高效、无创、无免疫源性等优点,因此,近年来脂质微泡成为一种靶向给药的新途径。诺帝(Nordy)是一种基于天然脂氧化酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid, NDGA)的化学结构而合成的手性化合物。近年的研究证实NDGA在体内外均具有抑制血管生成和人多种肿瘤的效应。本研究拟制备一种包载诺帝的脂质体微泡造影剂,研究超声介导载诺帝脂质微泡对血管内皮细胞增殖的影响。方法:(1)采用机械振荡法制备携载诺帝脂质微泡造影剂,在光学显微镜下观察其形态和大小,使用Malvern激光粒径测量仪和Malvern表面电位检测仪检测其粒径和表面电位,应用高效液相色谱法(RP-HPLC)检测包封率,使用Sequoia 512型彩色多普勒超声仪,对比脉冲序列(contrast pulse sequencing, CPS)成像技术观察其在兔肝内显像;(2)采用胰酶灌注法消化获取人脐静脉内皮细胞,进行传代培养;(3)通过MTT比色法、台盼蓝排斥试验选择超声破坏脂质微泡对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作用的相关参数;(4)采用血管内皮细胞体外三维培养的方法观察超声辐照载诺帝脂质微泡对内皮细胞体外形成小管样结构的影响;(5)采用人肺腺癌细胞株(A549细胞)上清液培养人脐静脉内皮细胞株(EA.Hy926)的方法,观察超声辐照载诺帝脂质微泡对诱导后细胞的影响,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法观察其肿瘤内皮细胞标记物8(tumor endothelial marker 8, TEM8)表达情况。结果:(1)载药脂质微泡的浓度为(2.53±0.52)×109个/ ml,粒径为(2.61±0.32)μm,Zeta电位为+(17.52±2.04) mV;载诺帝脂质微泡的包封率(27.1±2.01)%,载药量为(10.9±0.90)%;微泡经外周静脉注射后,兔肝可见良好、持续的增强显像效果。(2)采用胰酶灌注法原代培养HUVEC,经细胞形态学和免疫组化鉴定证实为HUVEC。(3)当诺帝浓度为50μmol/L,100μmol/L,150μmol/L,200μmol/L时,细胞在24 h的增殖抑制呈剂量效应关系。频率为1.5 MHz,机械指数(mechanical index, MI)1.9,时间60 s、90 s、120 s、150 s超声破坏诺帝微泡,在120 s时细胞膜对大分子的台盼蓝染料暂时性开放,染料进入细胞并被细胞俘获。(4)比较空白组、单纯诺帝微泡组、诺帝溶液组、超声辐照诺帝溶液组、超声辐照载诺帝脂质微泡组对管腔结构形成抑制情况。与其他各组相比,超声辐照载诺帝脂质微泡组抑制作用更加显著。(5)经诱导后的EA.Hy926细胞具有肿瘤血管内皮细胞(Td-EC)的特征。超声辐照载诺帝微泡可以使Td-EC表达TEM8减少。结论:(1)采用机械振荡法制备的载诺帝脂质微泡,能够通过肺血管床,符合外周静脉注射要求,可以作为体内递送诺帝的一种方式。(2)载诺帝脂质微泡可以显著抑制体外管腔结构的形成。(3)载诺帝脂质微泡可以使Td-EC表达TEM8减少,可以使Td-EC趋于正常化。