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【研究目的】:组蛋白甲基转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(enhance of zeste homolog2,EZH2)在脓毒症患者免疫细胞上的表达对免疫功能的调控及机制不明。本研究中我们探寻了EZH2在脓毒症患者外周血T淋巴细胞主要亚群包括(CD4~+T和CD8~+T细胞)上的表达规律及动态变化,深入探究EZH2表达对预后的预测价值,通过其特异度和灵敏度评价预测效果,并为寻找脓毒症靶向治疗点提供理论依据。【研究方法】1.研究对象:根据sepsis 3.0定义,前瞻性选取急诊ICU、中心ICU就诊的脓毒症患者作为脓毒症组,选取同期至同济大学附属东方医院体检中心体检健康人作为健康对照组。根据纳入标准及排除标准共筛选出48例脓毒症患者(脓毒症组)及40例健康人群(健康对照组)为研究对象。2.收集所有纳入实验的脓毒症患者临床资料:(1)性别、年龄、28天存活率、入住和转出ICU时间、慢性疾病病史、是否使用机械通气、是否应用血管活性药物等基本资料。(2)收集研究对象确诊后第1天、3天、7天的血常规、血气分析以及感染指标包括C反应蛋白、降钙素原、白介素-6等。(3)结合1、3、7天的各项指标计算出GCS评分、SOFA和APACHE II评分等指标。(4)使用流式细胞技术检测患者第1、3、7天CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群上EZH2的表达情况。收集纳入实验的健康对照组的基本资料:(1)性别、年龄。(2)收集血常规、SOFA和APACHE II评分等指标。(3)使用流式细胞技术检测CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群上EZH2的表达情况。3.根据患者入住ICU确诊脓毒症后28天后的生存或死亡结果,将脓毒症组分为死亡组与存活组。分析患者病程中EZH2的表达水平与28天预后的关系。根据脓毒症患者预后预测指标的相应ROC曲线,寻找最佳截断值、利用最佳截断值高低将脓毒症患者进行重新分组,分为高表达组、低表达组,进一步验证脓毒症预后模型的预测效力。4.采用SPSS20.0进行数据分析。计量资料进行正态性检验,正态分布数据采用独立样本T检验。非正态分布数据两组比较采用Mann Whitney U检验。定性资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。比较有统计学差异的指标进行单因素logistic回归分析;单因素有统计学意义的指标再行多因素logistic回归分析,筛选出脓毒症患者死亡相关的独立危险因素。利用ROC曲线找出最佳截断点,并计算各指标曲线下面积、敏感度及特异度。采用Spearman相关分析方法,分析EZH2与病情严重程度、SOFA评分、APACHEII评分、感染相关指标之间的相关关系。【结果】:1.脓毒症组CD4~+T细胞EZH2阳性率、CD4~+T细胞EZH2的平均荧光强度、CD8~+T细胞EZH2阳性率、CD8~+T细胞EZH2的平均荧光强度均明显高于健康对照组,随着脓毒症患者病情加重,EZH2表达增加,且第7天的指标最高。2.28天脓毒症患者死亡组CD4~+T细胞EZH2阳性率、CD4~+T细胞EZH2的平均荧光强度、CD8~+T细胞EZH2阳性率、CD8~+T细胞EZH2的平均荧光强度高于存活组,随着病情进展,外周血T细胞上EZH2的表达增加。而死亡组的CD4~+、CD4~+与CD8~+比值是低于存活组的,外周血T细胞上EZH2的表达在死亡组组内第1、3、7天无明显差异。3.采用多因素分析脓毒症患者28天不同预后的第1天、第3天的临床数据与流式数据。(1)脓毒症患者第1天CD8~+T细胞EZH2的平均荧光强度为预测患者28天死亡的独立危险因素。ROC曲线分析:CD8~+T细胞EZH2的平均荧光强度的曲线下面积为0.775(0.631-0.918),可预测28天预后情况,且CD8+T细胞EZH2的平均荧光强度预测28天死亡的灵敏度、特异度分别是75%,82.1%,预测28天死亡的特异度优于APACHE II评分,灵敏度优于SOFA评分,具有一定的临床意义。联合脓毒症患者第1天SOFA评分、APACHE II评分、CD8~+T淋巴细胞EZH2~+的平均荧光强度三项指标,ROC曲线下面积是0.973(0.924-1.000),灵敏度分别为93.8%,特异度为96.4%,优于单个指标的预测效能,可以起到早期预测脓毒症患者预后的价值,对判断患者预后起到重要的作用。(2)脓毒症患者第3天CD4~+T细胞EZH2阳性率、CD4~+T细胞EZH2的平均荧光强度、CD8~+T细胞EZH2阳性率、CD8~+T细胞EZH2的平均荧光强度,为28天死亡的独立危险因素。ROC曲线分析:CD8~+T细胞EZH2的平均荧光强度曲线下面积0.936(0.842-1.000),其灵敏度为66.7%,特异度为100%,对于预测28天死亡的特异度优于SOFA评分、APACHEII评分,对于脓毒症患者远期具预后有一定的临床意义;CD4~+T细胞EZH2的平均荧光强度曲线下面积为0.829(0.625-0.998),其特异度为52.17%,灵敏度为100%,对于预测28天死亡的灵敏度优于SOFA评分。4.CD8~+T淋巴细胞EZH2~+的平均荧光强度与脓毒症组疾病严重程度、存活时间、住院时间的Spearman相关性显示:脓毒症组第1天CD8~+T细胞EZH2的平均荧光强度与第3天、第7天APACHEII评分呈正相关,与存活时间呈负相关。脓毒症组第3天CD8~+T细胞EZH2的平均荧光强度与第1天、第3天、第7天APACHEII评分呈正相关,与存活时间、住院天数呈负相关,与第1天、第3天SOFA评分呈正相关。另外,我们还发现脓毒症组第1天CD4~+T细胞EZH2阳性率与第1天SOFA评分呈正相关。5、脓毒症患者第3天CD4~+T淋巴细胞上EZH2的阳性率、CD4~+T淋巴细胞EZH2~+的平均荧光强度、CD8~+T淋巴细胞上EZH2的阳性率、CD8~+T淋巴细胞EZH2~+的平均荧光强度等指标与第7天炎症指标降钙素原、乳酸、中性粒细胞与淋巴细胞比值、血小板与淋巴细胞的比值均呈正相关。【结论】1.与健康人相比,脓毒症患者外周血T淋巴细胞上EZH2表达水平显著增加,且随着脓毒症患者病情加重,EZH2表达水平增加。2.脓毒症患者外周血T淋巴细胞上EZH2的表达在第1、3、7天均存在差异,死亡组高于存活组,随着病情进展,外周血T细胞上EZH2的表达增加。死亡组组内第1、3、7天患者外周血T细胞上EZH2表达均无明显差异,考虑与死亡组患者病情较重,无明显缓解有关。3.脓毒症患者第1天指标CD8~+T细胞EZH2的平均荧光强度,第3天CD4~+T细胞EZH2阳性率、CD4~+T细胞EZH2的平均荧光强度、CD8+T细胞EZH2阳性率、CD8+T细胞EZH2的平均荧光强度均为28天预后的独立危险因素,其判断预后效力可能优于目前常用的脓毒症SOFA评分、APACHE II评分。4.脓毒症患者外周血T淋巴细胞上EZH2表达与患者病情严重程度相关,且EZH2表达越高,脓毒症患者病情越重。5.患者第3天的外周血T淋巴细胞上EZH2的表达与第7天炎症指标相关,考虑对临床预后具有一定的指导意义,具有可观的预测效能。