从分子生物学角度讲，肿瘤是一种基因病，是遗传因素与环境因素共同作用于机体，导致多种基因发生突变，从而导致正常细胞恶变。大多数肿瘤的基因突变都是体细胞突变。因为这些突变只存在于肿瘤细胞中，但是某些基因突变可能存在于个体的生殖细胞，这类基因变异不仅能导致不同类型肿瘤的形成，同时也能将这些变异遗传给下一代，导致某些个体对肿瘤的易感性。这些基因主要包括癌基因，抑癌基因和DNA错配修复基因(DNA mismatch repair genes，MMR)。目前在高发区食管癌的研究中，对于环境因素的研究包括化学性，生物性，营养等的研究已很多，已经证实化学因素如亚硝胺类化合物能引起食管上皮细胞癌变，并可引起其分子生物学的改变。遗传学分析表明高发区食管癌有明显的遗传易感性。食管癌遗传学研究发现，食管癌病人外周血细胞对DNA损伤后的修修复力降低，DNA脆性增加，癌郑州大学2002年硕士毕业论文 胎儿食管及食管癌微卫星不稳定a Val384ASP突变的研究 组织中有许多染色体的明显改变。在食管癌中对于癌基因和 抑癌基因的研究己相当多，而对于DNA错配修复基因的研 究相对较少。因此检测食管癌组织中其DNA错配修复基因 是否有缺陷，可以帮助我们进一步研究食管癌的发病机制。 同时，由于胎儿时期很少受到外界环境因素的影响，胎儿的 分子生物学特性主要是由其双亲所决定的。研究高发区一般 人群胎儿食管的分子生物学特性，可以帮助我们了解本地区 食管癌发生的一些先大性因素或是地域性因素，并初步确定 其后代是否具有肿瘤易感性。 人类错配修复系统主要集中在对家族性遗传性非息肉性结肠癌（Heredl鲫 no叩olyposis col皿ctal cancer HNPCC）的研究上。hMLHI和 hHSHZ的突变是造成 HN’PCC发生的主要原因，而微卫星不稳定性（microsatellite instability Msl则高达90％。MSI己成为判断肿瘤预后及肿瘤生物学的一个重要指标，监测MSI状态成为筛选hpCC的一个有效手段。 本实验同时检测食管癌及胎儿组织的hMLHI第12外显子的突变情况及hMLH基因附近的微卫星位点D3 SI 283的 不稳定性，以确定高发区胎儿是否具有发生食管癌的易感性及初步探讨DNA错配修复基因在食管癌发生中的作用。 材料与方法：（）正常胎儿食管12例取自安阳，孟州 两地，均为食管癌高发区，胎儿胎龄410个月“．25士2．45人 于正常引产后lh内取得J儿食管取后其中上段立即置于液 氮中保存，然后储存于80 oC超低温冰箱中 Z胎儿食管中下段 2 郑州大学2002年硕士毕业论文 胎儿食管及食管癌微卫星不稳定性及Val3eq突变的研究 和部分胎胃则保存于”85％的乙醇中。食管癌标本取自安阳市 月瘤医院，患者年龄35－77岁（57．77士10．05），所有标本均 于术后lh内取得。其中一部分立即置于液氮中保存，其余则 保存在 10％的甲醛中。u）常规酚／氯仿法提取冰冻胎儿食管 组织和食管癌组织的基因组 DNA。uSI：PCR扩增后， PCR产物 95 C变性，行 8％变性聚丙烯酚胺凝胶电泳，电泳 结束 0l渊酸银染色。②PCR－SSCP：PCP扩增后，PCR产物 95 oC变性，行10％变性聚丙烯酚胺凝胶电泳，电泳结束0．l％ 硝酸银染色。＠PCRESCP出现异常的条带其 PCR产物直 接测序。u）统计学分析采用SPSS10．0软件包进行处理，显 著性水准取a＝0．05。 结果：（）胎儿食管有4例表现为MSI阳性，阳性率为 33．3％。食管癌中有14例表现为MSI阳性，阳性率为45．2％。 另有 5例食管癌表现为 LOH，占 16．l％。胎儿食管与食管癌 MSI阳性率差异无显著性（P＞0刀5人 Q）胎儿食管有4例 PCR毛SCP出现异常条带，突变率为 33．3o。食管癌中有 12 例PCR乃SCP出现异常条带，突变率为38．7O。胎儿食管与 食管癌PCR石SCP突变率差异无显著性 0功．05人 门） PCR毛SCP有异常条带的PCR产物直接测序显示突变位点位 于hMLHI第12外显子第1151位碱基存在碱基颠换（T—A， 杂合型人 使该碱基所处的第 3 84位密码于发生错意突变 （GTT一GAT，Vl384Asp）。 3郑州大学2002年硕士毕业论文 胎儿食管及食管癌微卫星不稳定性及Vl384Asp突变的研究 结论：门）微卫星位点 D3S1283在高发区食管癌及胎 儿食管具有不稳定性。Q）hMLHI基因缺陷在高发区食管 癌及胎儿食管有较高的突变率，提示可能与食管癌的发生有 关。门）高发区胎儿具有与食管癌相似的微卫星及WHI 基因的改变，有肿瘤易感性。