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本文通过细胞培养技术,研究氟对成骨细胞和破骨细胞形态结构,以及对成骨细胞体外增殖和矿化能力的影响。试验采用24h内昆明乳鼠,拉颈处死,无菌取出头盖骨,在超净工作台内将其剪碎,先用0.25%胰蛋白酶37℃消化30min,然后用0.2%胶原酶37℃振荡消化60min,反复吹打骨片分离更多细胞。用含15%胎牛血清的DMEM培养液将细胞配成所需浓度进行接种。培养第二天换液,以后隔天换液。采用此法成功分离培养出了具有典型特征的成骨细胞。培养过程中,成骨细胞表现出不同的体外生长时相(潜伏期、对数生长期、水平静至期),刚接种的成骨细胞呈球形,4h后部分细胞贴壁展开,24h后细胞完全贴壁展开。第3d时,成骨细胞呈半汇合状态;5d时,细胞完全汇合;7d时,细胞重叠生长,呈铺路石状;9d时,成骨细胞密积生长;11d时,基质堆积,细胞结节形成;13d时,矿化结节形成。氟对成骨细胞形态结构、体外增殖能力的影响具有剂量-时间依赖性。大于10-4mol/l的氟对成骨细胞具有明显的细胞毒性作用,10-1mol/l和10-2mol/l氟能致成骨细胞急性死亡。氟浓度小于10-4mol/l时,对成骨细胞的毒性作用不明显。10-5mol/l~10-7mol/l氟可促进成骨细胞的体外增殖,10-3mol/l和10-4mol/l氟对成骨细胞的体外增殖具有抑制作用。氟对成骨细胞矿化能力的影响具有剂量依赖性。经实验观察表明,10-5mol/l~10-7mol/l氟能促进成骨细胞的矿化能力。另外,试验采用2周龄的昆明小鼠,拉颈处死,在超净工作台内无菌分离长骨,剔除骨周组织和骨骺端。将分离骨骼置于冷DMEM培养液中,分成两半,刮取骨髓,而后吹打骨碎片,使更多细胞脱落。待骨片沉淀后,将骨髓细胞接种,30min后收集未贴壁的细胞,重接种于成骨细胞上培养,以后隔2d换液。用此法成功诱导培养出了具有多核、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性的破骨细胞。氟对破骨细胞形态的影响呈剂量-时间依赖性。倒置相差显微镜下10-1mol/L～10-3mol/L氟对破骨细胞呈现明显毒性反应。10-1mol/L、10-2mol/L可致破骨细胞急性死亡。10-4mol/L～10-7mol/L氟对破骨细胞形态的影响不明显。氟可影响破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的分泌,呈剂量依赖性。