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生物柴油是一种由甘油三酯与甲醇或乙醇通过酯交换得到的生物燃料,具有含硫物质和含芳香性物质量低、燃烧性能优良及生物可降解性等优点。目前,用植物油脂和动物油脂来制备生物柴油已不能完全满足人们生活生产的需求,因此对微生物油脂这一新油脂资源的开发和研究越来越受到人们的关注。并且,制备生物柴油的原料多为饱和脂肪酸,而微生物油脂中酵母所产油脂的饱和脂肪酸含量高。皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)是一株高产油脂的菌株,其生长发育不受场地、季节等限制,发酵周期短,且所产脂肪酸成分与植物油脂脂肪酸成分相似,能为企业节约生产成本。本文以皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)为研究对象,将其定为出发菌株,对其进行诱变育种,筛选出高产油脂突变菌株,并对突变菌株命名为T.Cutaneum-9,在此基础上对突变株的发酵工艺条件进行研究。主要的研究结果如下:1.皮状丝孢酵母出发菌株生长及产油脂规律的研究皮状丝孢酵母生长012 h为适应期,1225 h为对数期,2540 h为稳定期,40 h以后为衰退期。皮状丝孢酵母发酵80 h左右时,其油脂产量为3.66g/L,含油率约为39.20%。皮状丝孢酵母所产脂肪酸主要以C16、C18为主,此类脂肪酸适于进行酯交换制备生物柴油。2.高产油脂皮状丝孢酵母突变株的选育采用60Co-γ射线在1.0 KGY、1.5 KGY、2.0 KGY三个不同剂量下对皮状丝孢酵母出发菌株进行辐射。三个不同的剂量致死率分别达到63.4%、85.9%、87.0%。以生物量和油脂产量为主要指标,通过菌株分离纯化,经生长发育、苏丹黑B染色及科学综合淘汰法筛选出高产油脂皮状丝孢酵母突变菌株,并对其命名为Trichosporom cutaneum-9,其生物量约达到9.1g/L,油脂产量约达到4.55g/L。与原始菌株相比,油脂产量提高了24.3%。3.Trichosporom cutaneum-9突变株产油脂发酵培养基配方的研究Trichosporom cutaneum-9突变株选用葡萄糖、酵母膏、维生素溶液和金属离子溶液为单因素,通过单因素试验和正交试验,以生物量和油脂产量为主要指标,确定最佳培养基配方:葡萄糖70g/L、酵母膏35g/L、金属离子溶液0.10g/L、维生素液0.25 g/L。Trichosporon-9按照此最优方案发酵,最后生物量约为9.87 g/L,油脂产量约为7.05 g/L。4.Trichosporom cutaneum-9突变株产油脂发酵条件的研究在优化发酵培养基后,为进一步提高油脂产量,对突变菌株的发酵条件进行了优化。选取发酵温度、接种量和转速为单因素,并采取单因素实验法,确定每一个单因素的选取范围。在单因素的基础上,考虑到因素与因素之间的相互影响,采取正交实验法进一步优化方案。通过实验后,最优方案确定为接种量10%、发酵温度28℃、转速180r/min。突变菌株经发酵条件优化后,其生物量约为11.5g/L,较发酵条件优化前提高了16%;油脂产量约为8.1g/L,较发酵条件优化前提高了14%。