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乳腺癌是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤,发病人群中99%为女性,且发病率呈逐年上升趋势。国际乳腺癌会议综合乳腺癌分子表达和临床特征,将其分为5种亚型,方便临床诊治和基础研究。乳腺癌的发生发展、转移浸润及预后情况与多种癌基因突变或异常表达有关。在分子水平上定位特定的原癌基因或抑癌基因,是目前最具靶向研究和诊治乳腺癌的切入点。TNK2基因因其非受体酪氨酸激酶活性,在乳腺癌早期筛查、靶向治疗和预后评价中获得了不少的关注,因此作为本研究所选用的目标基因。为了更加精准了解基因表达变化对乳腺癌发展进程有哪些影响,本研究关注了更加细化基因表达情况的基因选择性剪接调控机制。通过对比TNK2基因全基因表达变化和个别剪接异构体表达变化的情况,分析乳腺癌中高表达的TNK2基因剪接异构体在乳腺癌发生发展中的生物学作用,主要研究结果如下:1.合成TNK2基因剪接异构体特异性引物,利用RT-PCR方法在正常乳腺上皮细胞和四种不同表型的乳腺癌细胞系中扩增TNK2基因剪接异构体。比较其表达情况,发现TNK2基因剪接异构体1(Variant 1)在乳腺癌细胞系MDA-MB-231和T-47D细胞中呈异常高表达,确定MDA-MB-231和T-47D细胞用于后续研究。2.设计合成特异性干涉TNK2基因Variant 1和总TNK2表达的siRNAs,分别转染到MDA-MB-231和T-47D两种乳腺癌细胞系中,收集细胞后RT-PCR扩增TNK2基因mRNA,确定siRNAs可有效下调总TNK2及其Variant 1剪接异构体的表达水平。3.应用MTT细胞活力检测法、BrdU掺入法、流式细胞术和Western blot法,证实siRNA干涉TNK2基因Variant 1和总TNK2表达后,乳腺癌细胞的增殖受到了抑制,细胞周期阻滞在G1/S期;应用划痕检测法、Transwell小室法和Western blot法,证实TNK2基因Variant 1和总TNK2的表达下调后,乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力明显受到了抑制,同时这可能与抑制EMT和迁移侵袭有关的分子表达有关;应用平板克隆实验和软琼脂集落形成实验,证实抑制TNK2基因Variant 1和总TNK2表达后,乳腺癌细胞的克隆形成能力明显受到了抑制。4.应用DAPI免疫荧光法、流式细胞术和Western blot法检测细胞的凋亡情况,证实TNK2基因Variant 1和总TNK2的表达降低,并没有诱导乳腺癌细胞发生凋亡现象。结合实验结果分析,siRNAs干涉TNK2基因Variant 1的表达后对乳腺癌细胞增殖、迁移和克隆形成等转化特性所产生的抑制作用,强于或近似于干涉总TNK2表达后产生的影响,说明TNK2对部分乳腺癌生物学特性的调控作用主要是TNK2基因Variant 1介导的。