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目的前期研究发现子痫前期血清通过增加肾小球内皮细胞(HRGECs)CAV1表达增加HRGECs对大分子蛋白的通透性,提示HRGEC细胞CAV1表达异常参与了子痫前期尿蛋白形成的病理过程,但是,CAV1调控PE患者尿蛋白形成的具体分子机制不明,近期有研究发现子痫前期血清中存在miRNA表达异常,而miRNA异常表达通过对其靶基因表达的调控参与多种疾病的病理过程,因此,本研究以CAV1为靶基因,应用生物信息学方法预测CAV1表达可能的调控miRNA;检测CAV1靶向调控miRNA在子痫前期患者蛋白尿形成过程中的调节作用。方法1.利用miRBase,Targetscan,miRanda,miRWalk等生物信息学软件,预测对CAV1起靶向调控作用的miRNA,根据预选miRNA在各软件中的交集及其与子痫前期相关性,筛选出关联最强的预选miRNA。2.收集重度子痫前期患者与正常对照组血清各10例,用采集到的血清处理人HRGECs,Western blot技术检测HRGEC细胞CAV1蛋白表达水平,Evans-blue检测HRGEC单层细胞对大分子蛋白的通透性变化,qPCR技术检测预选miRNA的表达水平。3.利用脂质体转染技术在HRGEC细胞中转染各预选miRNA的mimic、inhibitor及阴性对照,使细胞过表达或降表达各预选miRNA,利用荧光定量PCR和Western blot技术检测HRGEC细胞CAV1 mRNA与蛋白的表达水平,利用Evans-blue检测HRGEC单层细胞对大分子蛋白的通透性变化。4.构建CAV1 3’UTR的双荧光素酶报告载体,利用双荧光素酶报告基因检测系统检测预选的miRNA与CAV1是否具有直接靶向关系。结果1.根据生物信息学方法预测结果与文献查阅:作为CAV1可能的靶向调控miRNA,miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204可能参与子痫前期发病,因此,本实验将miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204作为预选miRNA进行研究。2.重度子痫前期患者血清对HRGEC细胞miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204表达的影响:与正常孕妇血清比较,重度子痫前期患者血清可明显降低HRGEC细胞miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204表达,增加HRGEC CAV1蛋白表达与单层细胞对大分子蛋白的通透性。(p<0.05)3.miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204过表达与降表达对HRGEC细胞CAV1 mRNA与蛋白表达的影响:miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204过表达或降表达后,HRGEC细胞CAV1 mRNA的表达水平与阴性对照组相比均无明显差异,p>0.05;miR-204与miR-199b-5p过表达后,HRGEC细胞CAV1蛋白表达水平明显低于阴性对照组,p<0.05;而miR-199a-5p过表达后,HRGEC CAV1蛋白表达与阴性对照组相比无明显差异,p>0.05。miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204降表达组CAV1蛋白表达均明显上调,差异有统计学意义,p<0.05。4.miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204过表达与降表达对HRGEC单层细胞对大分子蛋白通透性的影响:与阴性对照组相比,过表达miR-199a-5p对HRGEC细胞通透性影响无统计学意义,p>0.05;过表达miR-199b-5p和miR-204均可降低HRGEC细胞对大分子蛋白的通透性,差异有统计学意义,p<0.05;降表达以上三种miRNA均可明显增加HRGEC细胞通透性,差异有统计学意义,p<0.05。5.根据预测的miRNA与靶基因结合位点构建3’UTR质粒载体,利用双荧光素酶报告基因检测系统进行分析,结果显示:miR-199b-5p和miR-204与CAV1有直接的靶向关系。结论生物信息数据库显示,miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204可能是CAV1的靶向调控miRNA;子痫前期血清通过miRNAs(miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204)-CAV1途径增加HRGEC单层细胞对大分子蛋白的通透性。miR-199a-5p降表达可能通过旁路调控途径调节HRGECs CAV1蛋白的表达,并影响HRGEC单层细胞对大分子蛋白的通透性。miR-199a-5p,miR-199b-5p,miR-204-CAV1通路可能参与了子痫前期患者蛋白尿形成的病理过程。