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衰老是每个人都要经历的生命过程。皮肤衰老是机体整体衰老过程的最早和最直观地体现。目前,大多数学者认为过多的氧自由基是导致皮肤老化的主要原因之一。辅酶Q10(CoQ10)和α-硫辛酸(ALA)是两种重要的抗氧化剂,具有较强的氧自由基清除能力。它们的水溶解性较差、化学性质不稳定和见光易分解等缺点限制了它们的应用范围。由生理相容性的脂质和表面活性剂制备的纳米结构脂质载体(NLC)可以负载脂溶性的活性成分,改善其水分散性和化学稳定性,而且可以缓慢释放活性成分,并改善它们的生物利用度。 本研究利用高压均质法制备负载活性成分的纳米结构脂质载体水分散液。在成功制备CoQ10-NLC和ALA-NLC后,对其进行一系列的表征,并分析研究它们的表观形貌。CoQ10-NLC的平均粒径为101.6 nm,多分散指数(PDI)为0.139; ALA-NLC的平均粒径为155.0 nm,多分散指数(PDI)为0.161。本研究证实了制备过程未对纳米结构脂质载体负载的活性成分的化学性质产生影响。另外,纳米结构脂质载体负载的活性成分的光稳定性得到明显改善。 通过研究负载活性成分的纳米结构脂质载体对细胞活力、细胞形态和细胞核形态的影响以及利用time-lapse成像实验等多种途径证实了其对HaCaT细胞没有明显的细胞毒性,表明它们具有较好的细胞相容性。Time-lapse成像系统实时、可视化地展示了CoQ10-NLC和ALA-NLC处理的HaCaT细胞的动态行为。 体外释放研究发现,纳米结构脂质载体负载的活性成分能够进行缓慢的释放。通过对NLC体系中活性成分的体外释放曲线进行拟合,并建立数学模型来阐释活性成分的释放机制。经皮行为实验证明,纳米结构脂质载体包裹活性成分后能够明显增加活性成分在皮肤内的滞留量,而且活性成分没有透过皮肤,从而避免了可能产生的全身性的不良反应。 对负载活性成分的纳米结构脂质载体进行的抗氧化功效研究表明,CoQ10-NLC和ALA-NLC具有对超氧阴离子、羟自由基和DPPH自由基的清除能力。本研究建立了人永生化角质形成细胞HaCaT细胞的氧化损伤模型。利用包括time-lapse成像实验在内的一系列方法,从细胞内活性氧、抗氧化酶体系和脂质过氧化等方面研究负载活性成分的纳米结构脂质载体对氧化损伤HaCaT细胞的保护作用,其保护机理主要为CoQ10-NLC和ALA-NLC可以增强氧化损伤细胞内SOD和GSH-PX的活性,减少细胞内MDA的含量,降低ROS水平,减轻活性氧自由基对细胞的氧化损伤。 ALA-NLC能够抑制B16小鼠黑色素瘤细胞中酪氨酸酶活性和黑色素的形成,表明其具有抑制皮肤中黑色素生成的能力。通过研究ALA-NLC对细胞活力、细胞形态和细胞核形态的影响以及time-lapse成像实验等多种途径证实了ALA-NLC对B16细胞具有良好的细胞相容性。研究发现,ALA-NLC还可以促进皮肤的水合作用,具有较好的保湿功效。所以,ALA-NLC是一种具有良好的细胞相容性和较好的保湿能力、能够抑制酪氨酸酶活性和黑色素形成的抗皮肤衰老的局部外用功效性组分。