论文部分内容阅读
目的：观察不同浓度姜黄素对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区、CA3/DG区不同时间点细胞形态学、N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDA-R)亚单位NR2A、NR2B的表达及细胞凋亡的影响.
方法：雄性SD大鼠225只,随机分成五组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、姜黄素30 mg/kg组(Cur30组)、姜黄素100 mg/kg组(Cur100组)及姜黄素300 mg/kg组(Cur300组).S组仅烧灼双侧椎动脉,游离双侧颈总动脉但不阻断;其余四组在烧灼双侧椎动脉、游离双侧颈总动脉后24小时,阻断双侧颈总动脉15分钟,造成四动脉阻塞全脑缺血模型,四组大鼠分别在缺血前1小时腹腔注射不同剂量姜黄素或等容积溶媒;除S组外,余四组大鼠分别在再灌注后2h、6h、1d、3d、7d处死;上述5组再分为两个亚组(各时间点n=6):①多聚甲醛灌注固定大脑组织后,通过HE染色观察各时间点海马细胞形态改变、免疫组化观察NR2A、NR2B的表达及DNA断端末端标记(TUNEL)法标记凋亡阳性细胞;②各时间点(n=3)大鼠急性断头处死,迅速冰上取海马组织液氮低温冰冻保存,裂解组织,提取目的蛋白,用免疫蛋白印迹法(Western blotting)对NR2A、NR2B进行半定量分析.
结果：1、形态学变化:S组海马各区锥体细胞排列整齐,边界清楚,核膜边界清晰,核仁深染、清晰.IR组细胞轮廓消失,80﹪以上细胞出现胞浆固缩,核固缩、碎裂.各Cur组70﹪以上的细胞边界尚清,核形状尚规则,核边界尚清,20﹪左右细胞出现核染色变深,胞浆部分消失等变性的表现.
2、NR2A、NR2B表达的变化:
A、免疫组化:各实验组海马CA1区、CA3/DG区NR2A蛋白表达规律相似,再灌注后开始下降,至1d达最低值,后逐渐升高至7d达表达高峰,但组内各时间点表达水平无统计学差异(P>0.05).Cur100组、Cur300组再灌注各点CA1区、CA3/DG区NR2A的表达水平均明显高于IR组(P<0.05),且表达水平Cur100组>Cur300组>Cur30组>S组>IR组.
各实验组CA1、CA3/DG区NR2B蛋白表达规律同NR2A的变化,和再灌注2h相比,1d表达最低,后开始升高,至7d出现表达高峰(表达水平明显高于2h、1d点,P<0.05);IR组CA1、CA3/DG区在7d NR2B表达高于S组及Cur100组(P<0.05).
B、免疫蛋白印迹:海马组织NR2A蛋白表达各实验组表达规律一致,和再灌注2h相比,6h表达增加,1d达最低值,后缓慢升高.Cur100组、Cur300组、Cur30组及S组再灌注各点NR2A的表达水平均明显高于IR组(P<0.05),且Cur100组>Cur300组>Cur30组>S组.
NR2B蛋白表达各实验组表达规律相似,再灌注6h升高,1d表达达最低值,后开始升高,直至7d达高峰(表达水平显著高于1d点,P<0.05),IR组在2h海马NR2B表达高于S组及Curl00组(P<0.05).
3、凋亡细胞计数:各实验组凋亡细胞主要集中在CA1区,再灌注后2h出现少量凋亡细胞,后逐渐增加,3d达到高峰后减少,至7d仍有少量凋亡细胞存在,IR组各时间点凋亡细胞数明显高于S组及Curl00组(P<0.05),Cur300组各时间点凋亡细胞数高于Cur100组(P<0.05).
结论：姜黄素减少缺血性神经元凋亡的发生可能与增强缺血再灌注大鼠海马CA1区、CA3/DG区NR2A蛋白的表达、降低CA1/CA3/DG区NR2B蛋白表达,增加NMDA-R可塑性有关.但高浓度姜黄素(300 mg/kg)反而降低NR2A蛋白表达、增强NR2B蛋白表达而促进神经元凋亡.