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目的:本研究旨在寻找差异的血清miRNA在慢性乙肝肝纤维化进展中的表达及探讨其诊断价值。方法:本次研究共计分为三步,即发现,筛选和验证。在发现阶段中主要应用技术为新一代深度测序技术（Illumina Hiseq 2000）,发现集样本经过总RNA提取及质检、文库构建、cDNA经纯化后在Illumina’s Cluster Station上生成DNA簇后上机（Illumina q2000）进行测序,对发现差异的miRNA通过筛选集qRT-PCR检测,miRNAs的表达水平由Ct值衡量。两组差异表达基因的比较用2-△△ct表示,并Logistic回归建立miRNA方程。利用验证集验证miRNA panel的诊断效应。病例来自于我院2017年1月1日至2019年1月30日慢性乙肝感染者进行肝穿刺病理检查的患者。共入选114例进行过肝穿刺慢性乙肝病例,43例正常对照组,对照人群来自我院体检中心的血清标本。发现集:健康对照3例（CN）,轻度肝纤维化3例（MF）,中重度肝纤维化3例（SF）;筛选集:健康对照20例（CN）,轻度肝纤维化20例（MF）,中重度肝纤维化20例（SF）;验证集:健康对照20例（CN）,轻度肝纤维化36例（MF）,中重度肝纤维化32例（SF）。结果:轻度肝纤维化组和中度以上肝纤维化组在病毒学指标方面无明显差异性。通过测序分析,对照组、慢性乙肝轻度、中度以上肝纤维化组经过初级分析后得到9739507,10031720和9990867条原始序列,经过去除冗余后剩余289819,469367和311364条可比对序列。对三组数据归一化后比较,在肝纤维化不同损伤,血清miRNA在CN和MF两者的表达差异,共发现84条有差异显著性的miRNAs,符合表达差异倍数4倍以上,P<0.05的8个miRNA为上调基因,18个下调miRNA表达基因。血清miRNA在MF和SF两者的表达差异,共发现124条有差异显著性的miRNAs,符合表达差异倍数4倍以上,P<0.05的15个miRNA为上调基因,13个下调miRNA表达基因。利用筛选样本集对上述表达差异的47个差异miRNA进一步筛选,筛选条件为:Ct值〈35,检测率〉75%,在CN和MF两者的表达差异,共筛选出4个候选miRNA,分别为:hsa-miR-34a-5p,hsa-miR-1228-3p,hsa-miR-122-5p和hsa-miR-26a-5p。在MF和SF两者的表达差异,共筛选出2个候选miRNA,hsa-miR-34a-5p和hsa-miR-337-5p。使用Logistic回归建立回归方程,MF区别健康对照组的Logit P1=-3.354+0.9354*miR34-0.3546*miR26a,我们将SF,MF视为独立变量,miRNA的循环数视为协变量,使用Logistic回归建立回归方程。SF区别MF的Logit P2=-4.235+1.2433*miR34a+0.5483*miR337。miRNA panel1（MF vs healthy）曲线下面积（AUC）为0.829（95%CI=0.705 to 0.917）;敏感性=66.7%,特异性=90%,（P<0.0001）。miRNA panel2（SF vs MF）的AUC为0.663（95%CI=0.518 to 0.788）;敏感性=50%,特异性=85%（P<0.05）。结论:miRNA在慢性乙肝肝纤维化进展中发挥重要作用,我们发现了miRNA在正常对照和慢性乙肝肝纤维化中表达差异,并且在肝纤维化的病情进展中仍然存在差异表达的miRNA。并且建立miRNA组合对肝纤维化的诊断具有一定价值。