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背景与目的：卵巢癌是妇科生殖系统肿瘤中致死率最高的恶性肿瘤。由于卵巢癌早期症状不明显,且生长迅速并易扩散,往往在患者确诊时己处于卵巢癌的晚期,因此对卵巢癌侵袭与转移机制的研究具有重要的理论与临床价值。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是一种对脉管新生具有促进作用的生长因子。已有多项研究证实VEGF参与肿瘤细胞的生长、侵袭及转移。本课题的前期实验应用比较蛋白组学研究发现与卵巢癌侵袭高度相关的两个蛋白质：Ezrin和Lamin A/C在VEGF诱导前后的表达存在显著差异,推测它们很可能参与了VEGF对卵巢癌侵袭转移的调控。近年来的研究发现,miRNA作为一类短链非编码RNA在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用,因此miRNA的作用机制备受关注。本课题利用生物信息学工具预测miRNA靶标基因,结果发现miR-205在Ezrin、 Lamin A/C的3’UTR均有结合位点。由此推测miR-205与VEGF介导的差异蛋白Ezrin、Lamin A/C间存在调控关系。miR-205是否参与了对卵巢癌侵袭转移的调控?为回答上述问题,本课题展开了miR-205介导VEGF促卵巢癌细胞侵袭机制的初步研究。方法：(1)培养人上皮性卵巢癌细胞系HO-8910(低转移株)、HO-8910PM(高转移株)、SKOV-3(低转移株)及SKOV-3ip(高转移株)4株配对的细胞系。(2)免疫细胞化学检测VEGFR(包括VEGFR1和VEGFR2)在HO-8910细胞中的表达。(3)Transwell小室模型检测VEGF处理低转移细胞株前后细胞侵袭能力的变化。(4)流式细胞术检测VEGF处理低转移细胞株前后细胞的凋亡情况。(5)MTT法测定VEGF处理低转移细胞株前后细胞的增殖能力变化。(6)miRNA芯片技术检测VEGF处理HO-8910细胞前后miRNA的表达谱变化,并使用IPA软件分析差异蛋白和差异miRNA构建相互作用网络图。(7)Real time PCR检测各组细胞Ezrin、Lamin A/C mRNA及miR-205的表达水平。(8)Western blot检测各组细胞Ezrin、LaminA/C蛋白质的表达。结果：(1)在接种数目、培养条件与时间相同的情况下,HO-8910PM和SKOV-3ip较HO-8910和SKOV-3生长速度快、细胞数目多。(2)VEGFR1和VEGFR2在卵巢癌细胞HO-8910中均呈强阳性表达。(3)VEGF处理低转移卵巢癌细胞株后,细胞的侵袭能力增强(P<0.05)。(4)VEGF处理低转移卵巢癌细胞株后,细胞的凋亡数减少(P<0.05)。(5)VEGF处理低转移卵巢癌细胞株后,细胞的生长增殖能力降低(P<0.05)。(6)miRNA芯片分析结果发现VEGF处理HO-8910后,有32种差异表达的miRNA(P<0.05),其中18种上调,14种下调,IPA软件显示差异表达miRNA与前期发现的17个差异蛋白直接的作用通路共11条,与miR-205有关的调节通路有4条。(7)Real time PCR检测发现未经处理时Ezrin mRNA在高转移的HO-8910PM及SKOV-3ip细胞中表达均较低转移组低(P<0.05),但Lamin-A/C mRNA在两组转移性不同的细胞系中表达变化不一致,即Lamin-A/C mRNA在高转移的HO-8910PM表达明显较低(P<0.05),而在高转移的SKOV-3ip细胞中却表达升高(P<0.05)。VEGF处理后低转移组中Ezrin、Lamin A/C的mRNA水平均有意义下调(P<0.05),同时miR-205的表达水平则升高(P<0.05)。(8)Western blot显示VEGF诱导HO-8910和SKOV-3细胞24小时后,Lamin-A/C蛋白和Ezrin蛋白在HO-8910和SKOV-3细胞中的表达均下调(P<0.05)。结论：(1)VEGF能增强卵巢癌细胞系的侵袭能力,抑制其凋亡。(2) VEGF能下调卵巢癌细胞系中Ezrin、Lamin-A/C的mRNA及蛋白表达水平。(3)VEGF能上调卵巢癌细胞系miR-205的表达。(4)上调miR-205抑制Ezrin、Lamin-A/C的表达可能是VEGF促卵巢癌细胞侵袭的机制之一。