论文部分内容阅读
芥菜(Brassica juncea)几丁质酶基因BjCHI1受伤害、茉莉酸、虫食、真菌侵染等的诱导，因此BjCHI1启动子是一个诱导型启动子。目前报道的转基因作物中，驱动导入的外源基因表达大多数是强表达的组成型启动子，使得这些基因几乎在转基因植物的所有部位和所有发育阶段都高效表达，这无疑增加了植株的代谢负担，造成物质和能源上的巨大浪费。因此，研究和利用组织器官特异性启动子和诱导型启动子具有非常重要的应用价值和理论意义。本研究的主要目的是将芥菜BjCHI1启动子导入烟草，初步鉴定该启动子的功能。 本研究通过衔接头PCR技术，于芥菜BjCHI1启动子BjC-p(1098bp)5′端成功延伸了280bp的片段，获得长度为1378bp的芥菜BjCHI1全长启动子BjC-p1，将其序列与GenBank中已知序列进行对比，发现在GenBank中目前还没有该启动子的注册信息。 为了验证其功能，用芥菜BjCHI1启动子片段BjC-p0(1287bp)取代pBI121上的35S启动子，构建成植物表达载体pBICHP0。用农杆菌介导法将携带芥菜BjCHI1启动子片段的植物表达载体pBICHP0、pBICHP2和pBICHP5以烟草K326无菌苗叶片为转化受体进行浸染转化。总共获得103株PCR阳性烟草植株，其中29株pBICHP0、21株pBICHP2和0株pBICHP5为GUS阳性植株。 对转基因烟草(苗期4叶期)的GUS活性分析表明：(1) BjC-p0和BjC-p2驱动的GUS基因在伤害处理前几乎没有活性，但伤害处理3h之后，BjC-p0的GUS活性是处理前的29.85倍，BjC-p2的GUS活性是处理前的