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卵巢癌在妇科恶性肿瘤中发病率位于第三,病死率却高居第一。卵巢上皮细胞癌（Epithelial ovarian carcinoma,EOC）是其最常见的病理学类型。尽管外科手术、化疗药物、分子靶向治疗和免疫生物治疗方法在不断发展与改进,晚期EOC患者的预后仍非常差,5年生存率低于25%。最新癌症数据调查报告显示,2018年美国约有14070人死于卵巢癌。而在我国,根据郝捷院士2017年在中华医学会第十四次全国放射肿瘤学学术年会上报告,卵巢癌的发病率（占3.06%）和死亡率（占2.24%）均列女性肿瘤的第十位。因此,卵巢癌已经成为严重危害女性身心健康的重要疾病,给国家、社会和家庭带来沉重的经济负担,同时也给患者和家属带来巨大的心理压力。卵巢癌的这种高死亡率主要是由于大部分卵巢癌在出现临床症状时已处于晚期,而早期卵巢癌治愈率可达90%。转移和复发也是导致卵巢癌患者死亡的主要原因。与其它肿瘤不同,卵巢癌转移方式以直接向毗邻组织器官转移和腹腔种植转移为主。由于卵巢癌的这种天然扩散性,单独的手术切除并不能彻底消除肿瘤,因此后续常需要采用顺铂和紫杉醇等进行化疗。80%的卵巢癌患者对初次化疗敏感,然而大部分患者后期会出现化疗耐药,导致肿瘤复发。目前卵巢癌转移及耐药的分子机制尚不清楚,所以阐明卵巢癌发生、发展的分子调控机制对寻找卵巢癌高特异性、高敏感性的早期分子诊断标志物及治疗靶点具有重要的临床意义。微小RNA（microRNA,miRNA）是一类长度约22 bp的小分子非编码RNA,主要通过作用于靶mRNA的3’-UTR、5’-UTR甚至开发阅读框（open reading frame,ORF）区域来发挥转录后调控作用。MiRNA在个体生长、发育、分化和死亡等各个过程中均发挥广泛的调节作用。另外,miRNA的表达是被严格调控的,它具有组织特异性和时空特异性。近年的研究表明,许多miRNA在正常组织和肿瘤组织的表达存在明显差异。作为蛋白表达的调控者,miRNA在肿瘤中可以扮演抑癌基因或者促癌基因的角色。既往研究发现,miR-146b的异常表达与多种恶性肿瘤有关,如胶质瘤、甲状腺肿瘤和乳腺癌等。已有国外研究小组通过miRNA芯片筛选出miR-146b是卵巢癌组织与正常对照组织差异表达的miRNA,但未做进一步验证。我们的前期实验结果表明,miR-146b在EOC组织中表达明显下调,且与肿瘤分期呈现负相关关系,但miR-146b在EOC中的作用及调控机制尚不清楚。基于前期的发现,本研究采用qPCR方法检测了EOC组织和细胞系中miR-146b的表达水平,并建立了稳定过表达miR-146b的EOC细胞系,初步探讨和揭示了miR-146b在EOC中的调控作用,然后,我们预测并证实了卵巢癌中miR-146b的靶分子主要为Fbxl10,并且深入探究了Fbxl10下游调控分子机制,为卵巢癌的诊断、预后判断及治疗奠定了分子基础。本研究分为两大部分第一部分MiR-146b在EOC中的表达及对其生物学行为的影响目的:确定miR-146b在EOC组织及其细胞系中的表达变化,并进一步探讨miR-146b在EOC中的生物学作用。方法:1.qPCR检测EOC组织及其细胞系中miR-146b的表达水平。2.采用细胞骨架染色、划痕试验、Transwell迁移和侵袭试验研究miR-146b对卵巢癌细胞形态,迁移以及侵袭能力的影响。3.采用细胞计数、流式细胞术、EdU染色、蛋白免疫印迹等实验方法观察miR-146b对卵巢癌细胞增殖和药物敏感性的影响。4.裸鼠皮下成瘤实验观察miR-146b对肿瘤生长、浸润以及化疗反应性的影响。结果:1.qPCR结果证实miR-146b在EOC组织中表达水平是明显降低的,并且与肿瘤分期呈现负相关关系。2.过表达miR-146b明显改变了卵巢癌细胞形态,增强了细胞间连接,显著抑制了细胞的迁移和侵袭能力。3.MiR-146b加速了卵巢癌细胞增殖,并且提高了其对化疗药物的敏感性。4.体内实验证实miR-146b明显促进了裸鼠皮下瘤的生长,抑制了肿瘤向周围组织浸润,提高了肿瘤细胞的化疗敏感性。结论:MiR-146b的表达水平随着EOC的进展而逐渐降低,提示miR-146b可能对于卵巢癌分期诊断以及预后判断具有重要临床意义。MiR-146b调控卵巢癌细胞的迁移、侵袭、增殖及化疗敏感性,表明miR-146b在EOC中的发生,发展中发挥重要角色。第二部分MiR-146b调控EOC恶性生物学行为的分子机制研究目的:利用生物信息学方法综合预测和鉴定miR-146b可能靶基因,深入探讨miR-146b调控EOC的分子机制。方法:1.通过Targetscan（http://www.targetscan.org/vert71/）、miRanda（http://34.236.212.39/microrna/home.do）和PicTar（https://pictar.mdc-berlin.de/包含PicTar4和PicTar5）生物信息学网站预测出miR-146b的靶基因集合,筛选出潜在的靶基因Fbxl10,并验证靶向关系。2.干扰和过表达Fbxl10,观察卵巢癌细胞迁移、增殖及化疗敏感性的变化。3.根据细胞形态学、增殖及迁移能力的改变,采用蛋白免疫印迹、免疫荧光和免疫组化实验检测间质-上皮细胞转化（mesenchymal to epithelial transition,MET）相关分子的表达,并用ChIP实验验证Fbxl10是否直接调控MET相关分子。结果:1.荧光报告基因、qPCR及蛋白免疫印迹实验证实miR-146b负向调控Fbxl10基因的表达。2.卵巢癌细胞干扰Fbxl10和过表达miR-146b产生的形态学改变类似,细胞间连接紧密,细胞迁移能力降低,增殖加快,细胞化疗敏感性增高;相反,过表达Fbxl10的卵巢癌细胞则比较分散,细胞迁移能力增强,增殖减慢。3.蛋白免疫印迹实验、免疫荧光、免疫组化实验证实miR-146b通过下调Fbxl10,上调H3K4me3,进而上调Cyclin D1、VIM及ZO-1分子。ChIP实验证实Fbxl10直接结合在VIM及ZO-1分子的启动子上。结论:在卵巢癌细胞中,miR-146b抑制Fbxl10,进而促进了Cyclin D1、VIM和ZO-1分子的表达,最终抑制了细胞迁移及侵袭,同时促进了细胞增殖,提高了细胞化疗敏感性。我们推测低水平的miR-146b有可能促进EOC从早期向晚期进展。