论文部分内容阅读
系统性红斑狼疮是一种以全身免疫异常而导致多器官受累的自身免疫性疾病,其发病机制与病因尚不完全明确,可能与遗传、环境、性激素、药物及感染等因素有关。长期细胞毒性药物结合糖皮质激素治疗已被实践证明能有效阻止疾病的活动及减少肾脏损害,但其严重的副作用,如严重的嗜中性白血球减少症,败血症,出血性膀胱炎,不孕不育,白血病,淋巴瘤,限制了它的综合使用。全淋巴区照射最初作为治疗霍奇金淋巴瘤的一种治疗手段,被证实可以对细胞免疫产生一种持久的抑制作用。从1980年起,全淋巴区照射开始应用于对常规治疗无效的难治性狼疮肾炎,并且大多数患者在治疗后病情都能得到一个持久的好转。淫羊藿苷是小檗科淫羊藿属植物淫羊藿的活性成分,其主要药理活性为可以调节机体免疫力和激素水平等。本次研究以系统性红斑狼疮模型小鼠MRL/lpr作为研究对象,第一部分采用全淋巴区电子线照射治疗MRL/lpr小鼠,并以地塞米松治疗MRL/lpr狼疮小鼠作为阳性对照来观察全淋巴区电子线照射治疗MRL/lpr小鼠的疗效,并通过流式细胞检测法检测不同组小鼠脾脏的调节性T细胞水平,对其机制进行初步探讨。第二部分应用淫羊藿苷灌胃治疗MRL/lpr狼疮小鼠,观察其病情变化,并检测T淋巴细胞雌激素受体α的变化。第一部分:目的:观察全淋巴区电子线照射治疗MRL/lpr狼疮小鼠疗效,并探讨其与调节性T细胞的关系。方法:1.将18只4个月大的MRL/lpr小鼠随机分为A、B、C三组,每组6只,雌雄各半,A组每日予生理盐水0.5ml腹腔注射,每日1次,连续2周。B组用电子线予全身淋巴结照射治疗,2Gy/天,每周5次,连续两周。C组予地塞米松1mg/kg腹腔注射,每日1次,连续两周。实验结束后两周测各项指标。2.代谢笼法收集小鼠24小时尿液,考马斯亮蓝法测各组小鼠的24小时尿蛋白。3.ELISA法测各组小鼠的ANA及抗ds-DNA抗体水平。4.免疫荧光法观察各组小鼠的IgG抗体在肾脏的沉积情况。5.PAS染色法观察各组小鼠的肾脏情况。6.流式细胞仪测定各组小鼠脾脏细胞中调节性T细胞所占比例。结果:1.电子线放射治疗能降低小鼠尿蛋白含量。2.电子线放射治疗能减少小鼠血清中抗核抗体ANA及抗小鼠双链DNA(ds-DNA)抗体含量。3.直接免疫荧光显示B与C组小鼠肾小球内IgG免疫球蛋白沉积较A组减少,强度较弱,B、C两组无明显差异。4.PAS染色可见B组与C组肾脏病变较A组减轻,B、C两组无明显差异。5.流式细胞仪检测B、C两组的调节性T细胞所占比例较A组升高(P<0.05)。结论:1.全淋巴区电子线照射治疗能有效缓解MRL/lpr狼疮小鼠的病情,降低小鼠尿蛋白、血清抗核抗体、双链DNA抗体水平,对肾脏病理改变亦有恢复作用。2.全淋巴区电子线照射治疗机制可能与提高了体内调节性T细胞所占的比例有关。第二部分:目的:淫羊藿苷治疗MRL/lpr狼疮小鼠疗效观察及与雌激素受体α的关系。方法:1.将12只4个月大的雌性MRL/lpr小鼠随机分为2组,每组6只,设为A、B组。A组为阴性对照组,B组为淫羊藿苷灌胃治疗组。A组予0.9%氯化钠注射液0.5ml灌胃,每日一次,连续10日。B组予淫羊藿苷20mg/kg灌胃,每日一次,连续10日。2.ELISA法测各组小鼠的抗ds-DNA抗体及血清IL-6、TNF-α水平。3.尼龙柱法分离小鼠脾脏T淋巴细胞。4.实时定量PCR检测小鼠T淋巴细胞ERα的变化。结果:1.T细胞尼龙毛柱成功分离了小鼠的T淋巴细胞。2.淫羊藿苷灌胃组抗小鼠双链DNA(ds-DNA)抗体及细胞因子IL-6、TNF-α的表达水平较阴性对照组小鼠升高(P<0.05)。3.淫羊藿苷灌胃组小鼠T淋巴细胞ERα的表达量与阴性对照组无差异(P>0.05)。结论:淫羊藿苷20mg/kg灌胃治疗MRL/lpr狼疮小鼠10天,提高了小鼠体内双链DNA抗体及细胞因子IL-6和TNF-α的水平,加重了狼疮小鼠的病情。