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目的:1.将重组表达质粒PEDF-GFP以脂质体介导的方法注射到BN大鼠视网膜下,观察目的基因能否表达及其定位。 2.将重组表达质粒PEDF-GFP以脂质体介导从不同途径转染BN大鼠视网膜组织,进而探索合适的基因治疗给药方法。 3.探讨PEDF-GFP基因转染对氪激光诱导的BN大鼠CNV的发生,发展过程的影响。 方法:1.24只BN大鼠按数字随机分为6组,其中5组以脂质体介导的方法将重组表达质粒PEDF-GFP注射到BN大鼠视网膜下,另1组为对照组。在注射后1d、1w、2w、3w、4w分别用荧光显微镜观察GFP表达情况,用RT-PCR方法检测PEDF表达情况。 2.24只BN大鼠按数字随机分为6组,其中5组将重组表达质粒PEDF-GFP以脂质体介导经玻璃体腔注射入BN大鼠眼内,另外1组为对照组。在注射后1d、1w、2w、3w、4w分别用荧光显微镜观察GFP表达情况,用RT-PCR方法检测PEDF表达情况。 3.48只BN大鼠行氪激光光凝诱导脉络膜新生血管,然后按数字随机分组为PEDF组、脂质体组和对照组。PEDF组给予玻璃体注射脂质体和PEDF-GFP质粒混合物,脂质体组单纯注射脂质体,对照组不做处理。光凝后1w、2w、3w、4w分别行眼底血管荧光造影、脉络膜血管铺片、病理学检查,及PECAM-1表达的免疫组化检测,评价PEDF基因转染对氪激光诱导的CNV发生,发展过程的影响。 结果:1.视网膜下注射脂质体介导的PEDF-GFP质粒后1d即可见明显的绿色荧光分布于视网膜全层包括RPE细胞层,注射点附近全层视网膜呈强绿色荧光,远处局部外层视网膜也有荧光表达,2周和3周时荧光强度比1周增强,荧光范围也有所扩大,可以持续表达4周。对照眼无GFP表达。RT-PCR反应可以检测到转染后第1天PEDFmRNA表达就较对照组增强,第1周和第2周表达强度更高,到第4周注射组的视网膜组织中PEDFmRNA仍有较高水平的