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目的 比较人脐血CD34~+造血干／祖细胞在不同细胞因子组合的培养体系中诱导为DC的扩增效率及DC功能，寻找DC体外诱导扩增的最优细胞因子组合，为后续DC的相关研究建立基础平台。方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离并纯化脐血cD34~+造血干／祖细胞，体外以重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、肿瘤坏死因子(rhTNF-α)、干细胞集落刺激因子(rhSCF)、FLT3配体(rhFL)等构成的不同细胞因子组合诱导分化为DC。培养过程中观察细胞形态并分析细胞增殖动力学方式，流式细胞检测DC表面分子表达，MLR测定DC体外刺激同种异体T细胞增殖的能力，ELISA法检测DC上清中IL-12分泌。结果 CD34~+造血干／祖细胞在不同细胞因子组合诱导14天后均可见典型DC形态。几种组合中GM-CSF／TNF-α／SCF／FL不仅扩增效率最高(615±21．08倍，P=0．0001)，且诱生的Dc含量及成熟度最高，高表达各类DC分化相关抗原CD1α【(83．76％±8．29％)、CD83(87．94％±6．91％)、CD80(94．3％±0．90％)、CD54(95．46％±1．12％)以及HLA-DR(73．06％±4．05％)等，较其它3组有显著差异(P=0．0001)，在体外有很强的刺激同种异体T淋巴细胞增殖和IL-12分泌的能力。 结论GM．CSF／TNF-α／SCF／FL构成的细胞因子组合在体外能促进脐血CD34~+干／祖细胞大量扩增，并使之分化成熟为具有止常功能的DC，是一种理想的体外诱导扩增方案。第二部分 卵巢癌细胞株冻融抗原负载的树突状细胞诱导CTL抗卵巢癌免疫应答的体外研究 目的 在第一部分的基础上,进一步研究经卵巢癌冻融抗原负载的DC诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外杀伤卵巢癌细胞的细胞毒性效应。方法 利用MACS分离纯化脐血CD34~+细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法从卵巢癌细胞株SKOV3中提取的可溶性相关抗原负载DC。流式细胞学检测负载抗原后DC表面各种分化相关抗原的表达,ELISA法检测DC上清中IL-12的表达,MLR测定DC体外刺激T细胞增殖的能力,MTT法检测抗原负载DC激活的抗原特异性CTL对卵巢癌细胞的杀伤作用。结果 与未经抗原负载的DC相比,经卵巢癌抗原负载的DC不仅能更高地表达各种DC分化相关抗原CD1a(73.35%±2.94%vs.34.1%±2.35%)、CD83(73.9%±8.46%vs.54.68%±3.26%)、CD80(91.95%±2.48%vs.52.53%±3.18%)、HLA-DR(70.05%±2.35%vs.48.7%±2.07%)以及CD54(88.9%±5.52%vs.71.45%±2.29%),同时具有更强的刺激同种异体T淋巴细胞增殖和IL-12分泌的能力(P均小于0.05)。此外,卵巢癌细胞SKOV3冻融抗原负载DC激活的CTL在体外对SKOV3的杀伤率为77.35%,显著高于未经抗原负载的DC(P=0.0001)。结论 经卵巢癌细胞冻融抗原负载DC激活的CTL在体外具有更强的增殖能力和杀伤卵巢癌细胞的作用。树突状细胞;卵巢癌;冻融抗原;细胞毒性T淋巴细胞血管内皮生长因子;卵巢癌细胞;树突状细胞;CD34~+造血干/祖细胞