厚壳贻贝的营养指标评价及其抗炎机理探究

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贻贝(Mytilus sp.)被人们誉为“海中鸡蛋”,因其含有多种对人体有益的营养物质,包括各种多不饱和脂肪酸,8种人体必需氨基酸以及矿物质。新西兰翡翠贻贝(Perna canaliculus)冷冻干燥粉以及其脂溶性萃取物Lyprinol已经被证实具有较强的抗炎活性,并且安全、无毒,没有任何服用传统的NASIADs后引起的胃肠道副作用。而我国浙江舟山嵊泗产的厚壳贻贝营养价值高,其脂溶性提取物具有与Lyprinol相同的抗炎效果。本文以四个季度的厚壳贻贝为材料,比较研究四个季度贻贝样品的各项营养指标,综合评价不同季节的营养价值;我们还以夏季厚壳贻贝为材料,研究具有抗炎活性的软胶囊工艺;以抗炎活性最强的春季厚壳贻贝脂溶性提取物为研究对象,跟其他五种油进行初步比较研究贻贝脂溶性提取物的抗炎活性机理。其主要研究结果如下:1.通过对四个季度厚壳贻贝进行营养指标评价,利用气相色谱(GC)测定其脂肪酸含量,高效液相色谱(HPLC)测其氨基酸组成,电感耦合等离子体质谱(ICP—MS)技术测其无机元素含量。经过分析比较,从总的不饱和脂肪酸,n-3多不饱和脂肪酸总量以及两种重要的n-3多不饱和脂肪酸,EPA和DHA的总量来看,夏季贻贝的脂肪酸价值最高,而秋季和春季其次,冬季最低,所以从营养角度来讲,夏季的脂肪酸营养价值高于其他季节;秋季贻贝的必需氨基酸的总量最多(34.62%),而且四个季度的厚壳贻贝含有的必需氨基酸的比例都适合除了婴儿之外的其他人群,所以不管季节如何改变,厚壳贻贝的蛋白质中的氨基酸组成均符合人体生长与发育所需;四个季度的厚壳贻贝含有丰富Mg,Ca,Fe,Zn和Al等多种大量元素和微量元素。2.研究具有抗炎活性的软胶囊制备工艺中,经过单因素和多因素分析,发现在萃取温度为45℃,CO2流量为10kg/h,压力为30MPa条件下的萃取率最合适,达到5.1%。然后将萃取贻贝油以1:1(V/V)与食用调和油混合均匀,于软胶囊机进行压制,制成每粒含有200mg药液的软胶囊。3.在研究软胶囊工艺的同时,我们还对贻贝粉,超临界二氧化碳萃取油以及不同提取方法对贻贝脂溶性提取物的稳定性进行了研究。在贻贝粉温度性研究中,我们对在4℃和—18℃储藏分别在第0天,第30天,第60天和第120天进行其脂肪酸组成的测定,结果发现:与在4℃储藏相比,当储藏温度为—18℃时,包括C18:2n-6,C20:2n-6,C20:3n-6,C20:4n-6等n-6多不饱和脂肪酸及其总量,C18:3n-3,C20:3n-3等n-3多不饱和脂肪酸都没有显著性变化,比较稳定;对萃取油在不用储存条件下的稳定性,同样采取贻贝粉的研究方法,结果发现,在4℃充氮气的储存下萃取油脂肪酸组成比较稳定,而且最经济,并且发现萃取油本身含有一定量的二氧化碳,温度相对提高,并不会太影响其油的脂肪酸组成变化,而且对萃取油给以一定的蔽光措施,可以很好的保证其稳定性;采用四种提取方法,包括超声波提取,超临界二氧化碳萃取,氯仿-甲醇溶剂浸提以及索氏提取,结果发现传统的提取方法—溶剂提取法和索氏提取法两种提取方法提取的贻贝脂溶性物质中含有的n-3不饱和脂肪酸(分别为1603.40和1641.54 mg/100g)较其他两种提取方法要多,但与提取物的安全性来看,我们还是推荐不使用任何溶剂的超临界二氧化碳萃取法提取贻贝油。4.肉芽肿动物试验中,选取体重200 g雄性SD大鼠,共56只,分为7组,包括Lyprinol,春季厚壳贻贝油,深海鱼油,金枪鱼油,亚麻油以及消炎痛,连续灌胃一周,比较了各种油的抗炎活性。结果发现,除了阳性对照组消炎痛,春季厚壳贻贝油与Lyprinol的抑制率最高,春季厚壳贻贝油甚至高于Lyprinol,分别为37.48%和36.99%,深海鱼油,金枪鱼油以及亚麻油的抑制作用要低于贻贝油和Lyprinol,其中抑制率最高的是金枪鱼油组(20.13%);对五种油进一步脂肪酸分析结果发现,Lyprinol和春季厚壳贻贝油中的脂肪酸组成中,不饱和脂肪酸在这两种提取物中并没有占优势,其中Lyprinol含有的EPA+DHA,n-3PUFA,n-6PUFA,MUFA以及PUFA的量与深海鱼油和金枪鱼油差不多,而春季厚壳贻贝油这几种脂肪酸含量甚至低于两种鱼油的含量,所以我们可以推出Lyprinol和春季厚壳贻贝油较强的抗炎活性可能不是由两种提取油中含有的n-3PUFA,n-6PUFA,MUFA以及PUFA起主导作用;再以肉芽肿模型中的大鼠的肝脏和血清为研究对象,更深一步探讨贻贝油的抗炎活性是否与脂肪酸有关,通过对其脂肪酸组成分析,结果发现各个实验组之间的肝脏和血清中含有的多不饱和脂肪酸方面没有显著性差异,进一步证明了Lyprinol和春季厚壳贻贝油具有抗炎活性并不是因其含有的不饱和脂肪酸起主导作用,很大可能是Lyprinol和春季厚壳贻贝油中含有一类脂溶性的具有较强的抗炎活性物质。
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