为了提高草鱼肠的利用附加值,以及对草鱼肠抗菌肽的高效分离纯化及应用研究提供理论依据,本课题对草鱼肠道抗菌活性物质的提取工艺进行了优化,对（NH₄）₂SO₄分级沉淀、乙醇分级沉淀、超滤离心三种初步分离方法进行了比较,并结合葡聚糖凝胶层析和半制备反相高效液相色谱对草鱼肠道抗菌粗提物进行了分离。研究了色谱条件对草鱼肠道抗菌活性物质纯度鉴定的影响,并对提取的草鱼肠道抗菌肽的结构、抑菌效果及稳定性进行了分析。1)以草鱼鱼肠为原料,通过单因素试验和正交试验研究乙酸浓度、料液比和超声时间对初步提取草鱼肠道抗菌物质的影响。试验结果表明,草鱼肠道抗菌物质的最佳提取条件为：乙酸浓度为10%,料液比为1：3.5（g：mL）,超声时间10 min,4℃浸提24h。在此最佳提取条件下,提取液的抗菌活性较高,S.aureus抑菌圈直径为3.106 cm, E.coli抑菌圈直径为2.028 cm。2)对（NH₄）₂SO₄分级沉淀、乙醇分级沉淀、超滤离心三种初步分离方法进行了比较,并结合葡聚糖凝胶层析和半制备反相高效液相色谱对草鱼肠道抗菌粗提物进行了分离。试验结果表明,超滤离心分离效率高,分离效果好,适合作为抗菌活性物质的初步分离纯化方法。超滤离心下清液经Sephadex G-25柱分离得到对E.coli和S.aureus都具有抑菌活性的2号峰收集液,将其冻干后经半制备反相高效液相色谱分离,得到单一抑菌活性成分,对E.coli和S.aureus的抑菌圈直径分别为1.023 cm和1.106 cm。3)优化了分析型C₁₈反相高效液相色谱鉴定草鱼肠道抗菌活性物质纯度的色谱条件,并采用质谱技术对草鱼肠道抗菌活性物质一级结构和二级结构进行了分析。适宜的色谱分析条件为：乙腈体积分数50%,流速0.6 mL/min,柱温20℃；或乙腈体积分数60%,流速1.0 mL/min,柱温35℃。试验提取的抗菌肽总净电荷为0,Pro含量达25%,相对分子量约为752 Da,氨基酸序列为ACAYSPPGo同源性高的是红虫抗菌肽,蛙属抗菌肽Tigerinins、Ranacyclin-B-RN2、Ranacyclin-B-LK2和Ranacyclin-B-AL1。4)通过将固相合成草鱼肠道抗菌肽与氨苄西林、乳酸链球菌素、焦亚硫酸钠、苯甲酸钠和山梨酸钾进行对比,研究草鱼肠道抗菌肽的抑菌效果。试验结果表明：草鱼肠道抗菌肽对E.coli和S.aureus的抑菌浓度可低至0.16 μg/mL。浓度为0.16～100 μg/mL时,草鱼肠道抗菌肽对E.coli的的抑菌活性高于乳酸链球菌素、苯甲酸钠、山梨酸钾和焦亚硫酸钠,对S.aureus的抑菌活性大于氨苄西林。在0.16～1000 μg/mL范围内,草鱼肠道抗菌肽对S.aureus的抑菌活性高于山梨酸钾、乳酸链球菌素、苯甲酸钠和焦亚硫酸钠。浓度在20μg/mL以下时,其对E.coli的抑菌活性大于氨苄西林。5)为研究草鱼肠道抗菌肽的稳定性,对固相合成草鱼肠道抗菌肽进行了不同温度、pH、冻融、蛋白酶酶解和金属盐处理,试验结果表明：草鱼肠道抗菌肽在0～20℃低温下具有较好的抑菌活性,且在100℃以内,具有一定的耐热能力；酸性条件其抑菌活性最好；反复冻融之后,其对E.coli和S.aureus的抑菌效果稳定性明显降低。胃蛋白酶和中性蛋白酶降低了草鱼肠道抗菌肽对E.coli的抑菌活性,但提高了其对S.aureus的抑菌活性；谷氨酰胺转氨酶提高了草鱼肠道抗菌肽对E.coli的抑菌活性,但极大破坏了其对S.aureus的抑菌活性。MgCl₂、ZnSO₄、KCl和CuSO₄能提高草鱼肠道抗菌肽对S.aureus的抑菌活性；MgCl₂能提高其对E.coli的抑菌活性；A1₂（SO₄）₃和FeSO₄降低其对S.aureus的抑菌活性；ZnSO₄、KCl、CuSO₄、CaCl₂和NaCl降低其对E.coli的抑菌活性。