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伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起多种家畜和野生动物的一种急性、热性传染病,主要临床症状为发热、奇痒、急性脑脊髓炎和繁殖障碍。从2011年底开始,我国规模化猪伪狂犬病免疫猪场突然暴发猪伪狂犬病疫情。2018年1月,河南省济源市某规模化PRV免疫猪场发生疑似猪伪狂犬病症状的疫情,本试验通过采集病料经PCR鉴定,对疑似PR的病料接种至PK-15进行病原分离、空斑纯化、病毒滴度测定、病毒生长曲线测定和病毒致病力测定试验;对PRV分离株gE、gB、gC、gD和TK基因进行PCR扩增并测序,并对其序列进行分析比对,以及构建遗传进化树进行分析。通过对来自河南省济源市某猪场的疑似PR感染的病料进行PRV gE鉴定,初步确定PRV野毒感染;病料经研磨、除菌处理后接种至PK-15细胞,接种24-48h内PK-15细胞在显微镜下可观察到细胞变圆、脱落,培养基变浑浊等明显病变;再经空斑纯化,获得一株PRV野毒株,并命名为HNJY株。PRV分离株HNJY株TCID50为10-8.7/0.1 mL,小鼠致病性试验结果显示:将HNJY株病毒接种至小鼠后,小鼠出现奇痒症状并死亡,LD50的结果为10531 TCID50.HNJY株gE、gB、gC、gD和TK基因与国内外参考毒株进行序列比对,结果显示:HNJY株gE、gB、gC、gD基因与国内毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别高达 99.2%-99.9%和98.6%-100%、99.7%-100.0%和 99.2%-100.0%、96.9%-100%和94.6%1 00%、99.4%-99.9%和99.3%-99.8%,且高于欧美毒株;gB、gC基因与201 1年之后分离的国内变异株的核苷酸和氨酸同源性分别高达99.9%-1 00%和99.8%-100%、99.8%-100.0%和99.4%-1 00.0%,且高于2011年之前国内分离株和欧美毒株;TK基因与所有国内外毒株的核甘酸合氨基酸同源性高达99.4%-100%,表明TK基因高度保守。氨基酸进化树结果显示:gE、gB基因氨基酸进化树分为欧美毒株和国内毒株两大分支,HNJY株与国内毒株在同一分支:gC基因氨基酸进化树与毒株分离年代有明显关联,HNJY株与2011年之后分离的国内变异株在同一小分支上;gD、TK难因与所有国内变异株在同一分支上。HNJY株gD基因与国内外参考毒株进行氨基酸序列比对,在256位由丙氨酸突变为苏氨酸,进一步说明本试验分离株HNJY株属于一株独立的国内变异株。