新疆西瓜花叶病毒2号的分子鉴定及遗传多样性研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vrace_zh
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葫芦科作物是新疆重要的经济作物之一,因其品质高、口感好,在国内瓜果类产品中具有很大的市场,因此新疆是国内的一个重要的瓜果基地。近年来,病毒病的发生和危害直接威胁着新疆葫芦科作物的生产和发展。西瓜花叶病毒2号(WMV-2)是致病的主要毒源之一,危害葫芦科作物日益严重,国内有关其发生的报道也在不断增加。20世纪七、八十年代国内的一些专家学者对新疆哈密瓜、西瓜上发生的WMV-2采用生物学、血清学和分子生物学等方法进行了鉴定,但局限于小范围和少量葫芦科作物,也未对新疆WMV-2的遗传多样性做系统研究。对此,本论文对侵染新疆葫芦科作物的WMV-2进行了检测,并对来自新疆不同地区不同葫芦科作物的WMV-2的遗传多样性进行了初步研究。 2007-2008年从石河子、昌吉、玛纳斯、奎屯、乌苏、阿克苏、喀什等地采集到149个感染病毒病的西瓜、南瓜、黄瓜、甜瓜等十几种葫芦科作物样品,根据已报道的WMV-2基因序列设计引物,采用RT-PCR的方法,扩增外壳蛋白(CP)基因的cDNA片段,将其克隆到pGM-T载体上并进行序列测序和分析。结果表明:所采的149个样品中共检测出15个片段大小为917bp的WMV-2的样品,这些分离物CP基因全长为850个核苷酸,编码了197个氨基酸,在N端可变区明显不同于国内外报道的核苷酸序列,比其它地区分离物多出了6个核苷酸。将新疆分离物与5个GenBank中已经报道的不同国家或地区的WMV-2分离物CP基因进行同源性比对,其核苷酸同源性在92.3%~99.6%之间,由此从分子水平证明了这15个分离物为西瓜花叶2号病毒。分离物WMV-2-M1在第799位上出现了缺失,而其它分离物均为腺嘌呤A。 根据已报道的WMV-2美国分离物(GenBank序列号D13913)序列,设计出6对寡聚核苷酸引物。用单链构象多态性(SSCP)技术分别对该6对引物的PCR扩增产物进行遗传多样性分析。从聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱可以看出,6对引物中,除引物cp5和cp6的结果不明显外,其他4对引物的结果都能说明新疆15个WMV-2分离物之间存在一定的遗传多样性,其中引物cp4的结果最明显。用cp4这对引物对检测出的15个分离物进行PCR扩增,除WMV-2-S8、WMV-2-S9和WMV-2-W1分离物未扩增到目标片段外,其它12个分离物均能扩增到421bp左右的片段,和预计片段大小基本一致。根据PAGE图谱可将扩增到的12个WMV-2分离物归为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ五个类群,并且这些分离物的遗传多样性明显与地域和寄主有关。
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