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奶牛乳腺炎在奶牛养殖行业中发病率很高,治疗效果不佳,易于复发,对奶牛养殖业造成巨额经济损失,并引发严重的食品安全问题。病原微生物入侵是造成奶牛乳腺炎的最主要原因,引起奶牛乳腺炎发病的病原微生物种类繁多,感染情况和发病机制极其复杂。国内外关于乳酸乳球菌引起奶牛乳房炎的研究极少,本论文旨在通过对引起临床型乳腺炎的乳酸乳球菌进行分离鉴定、基因分型和致病特性等研究,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据和参考。研究方法:通过菌落特征、镜检、触酶试验和16SrRNA测序及序列比对从患有奶牛乳腺炎奶牛的牛奶样本中分离出乳酸乳球菌,随后生化试验进行表型分析、肉汤微量稀释法检测分离株的抗生素敏感性,对分离株进行基因分型。根据分型结果选择菌株对斑马鱼进行致死率试验选出强毒株。将不同浓度的乳酸乳球菌强毒株注入BALB/c小鼠乳腺内,通过剖检和病理观察结果筛选最适攻菌浓度。将50只分娩后小鼠分为两组空白组（control）和攻菌组（LL-1）,分别向第四对乳腺注射50μL的无菌PBS和10~9CFU/mL菌液。通过剖检和HE染色观察不同造模时间对乳腺组织损伤程度的变化;查看不同造模时间乳腺组织中的载菌量变化;使用ELISA检测不同时间乳腺组织中白介素6（IL-6）、白介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达量;使用qRT-PCR检测攻菌48 h乳腺组织中ASC、P65和磷酸化P65的表达量。20只小鼠分为4组进行抗生素治疗试验,分别空白、LL-1、LL-H和LL-L每组5只小鼠。攻菌后24 h后,LL-H和LL-L分别肌肉注射30 mg/Kg和10 mg/Kg的马波沙星,LL-1与空白组则在相同位置注射相同剂量的生理盐水,造模48 h后,将小鼠处死进行组织剖检和病理学观察;观察乳腺组织载菌量;IHC检测乳腺组织中TNF-α表达量;ELISA检测组织中IL-6、IL-1β和TNF-α表达量;TUNEL观察组织细胞凋亡状况。细菌细胞按MOI 5进行共培养,测定不同攻菌时间时乳酸乳球菌对MAC-T乳酸脱氢酶释放影响;细菌细胞按MOI 50进行共培养,观察不同攻菌时间细菌对细胞的侵袭率和黏附率;细菌细胞按MOI 5进行共培养,通过扫描电镜和革兰氏染色观察不同攻菌时间,细菌对细胞的损伤。结果:从457个患有临床型乳腺炎的奶牛乳汁中成功分离出8株乳酸乳球菌,临床分离率为1.75%,使用RAPD对8株分离株进行基因分型,共分出三个亚型,通过生化试验和抗生素敏感性试验进行表型分析,8株分离株表型间有差异,所有分离株均对马波沙星和万古霉素敏感。致死率最高为LL-1,选为强毒株。将LL-1注入小鼠乳腺,乳腺组织中IL-6、IL-1β和TNF-α表达量显著增高,腺泡结构遭到破坏,出现大量炎性细胞;组织中P65、磷酸化P65和ASC表达量显著增加。使用高低两种剂量马波沙星治疗乳腺炎小鼠,发现两个治疗组组织中的三种炎性因子含量和载菌量显著下降,通过TUNEL观察发现抗生素治疗可以使细胞凋亡率显著下降。乳酸乳球菌会损伤细胞,随着细菌细胞的共培时间的增加乳酸乳球菌对MAC-T的黏附率和侵袭率也逐渐增加,通过扫描电镜和革兰氏染色观察到乳酸乳球菌会损害细胞。结论:从临床型乳腺炎乳汁中分离出8株乳酸乳球菌,表型具有一定区别,根据基因分型共分出三个亚型。所有分离株均对马波沙星和万古霉素敏感。LL-1能诱导小鼠乳腺炎,激活NF-κB/p65信号通路,使乳腺上皮细胞发生变性坏死,破坏腺泡结构,造成组织损伤,引起细胞凋亡。使用马波沙星可缓解炎症反应,减少细胞凋亡数量,最佳使用剂量为30 mg/Kg。乳酸乳球菌对细胞有较强的细胞毒性,对MAC-T具有黏附和侵袭能力,可损伤细胞。临床上可以使用马波沙星治疗乳酸乳球菌引起的奶牛乳腺炎,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据和参考。