含绿色荧光蛋白生色团的聚合物的合成、自组装及其细胞成像

来源 :华东师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wyhai
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经过十几年的发展,绿色荧光蛋白(GFP)已广泛应用于医学与生命科学的研究中,如生物传感器、基因表达标记、细胞成像和生物探针等领域。GFP作为标记物标记样品时,进入细胞容易,检测简单,不需要辅助物和外加底物,同时只需要经过蓝光或者紫外光的简单照射,便会有明显的荧光出现,采用荧光显微镜即可观察,而且灵敏度很高,可用在单细胞的表达检测中。此外,GFP荧光稳定,光漂白现象不明显,细胞毒性低,构建载体简单,可作为活细胞检测标记物等。GFP分子组装形式为5条α螺旋与11条β折叠链组成的筒状结构,生色团处于该组装体的中央位置。该筒状结构能极大的限制荧光生色团的自由旋转,从而使其在一定波长激发光照射下表现出优异的荧光性能。但是,当这种结构解离之后,GFP的荧光性质会变得十分微弱。从本质上看,GFP的荧光强度变化是由于其荧光生色团周围的拓扑结构变化引起的,该过程可以看作是生物大分子自组装与解离的过程。众所周知,聚合物可以在一定条件下通过自组装形成结构紧密的聚集体,受此启发,本文拟用含绿色荧光蛋白生色团的聚合物进行自组装,得到有优异荧光性能的组装体,进而得到生物应用。本论文分为以下两个部分的工作:(1)首先使用Erlenmeyer氮杂内酯法制备得到荧光生色团(C),之后使其与已制备的二代烷氧醚树枝化基元苄溴(G2-Br)反应制备得到荧光生色团修饰的二代烷氧醚树枝化基元(G2-C)引发剂,以辛酸亚锡为催化剂,引发ε-己内酯开环聚合(ROP)反应,制备得到不同聚合度的二代烷氧醚树枝化基元-生色团-聚己内酯(G2-C-PCL)荧光聚合物。二代烷氧醚树枝化基元(G2)为亲水部分,水溶性好,而且空间位阻很大,在聚合物中能使得生色团的自由旋转得到极大的限制,从而提高荧光生色团的荧光性能;PCL部分为疏水链段,从而使该聚合物表现出了两亲性,使其能在水中组装成一定尺寸的纳米粒子,进一步增强荧光性能。本章中合成了不同聚合度的聚合物,并研究了其荧光性能,同时运用于细胞成像中,得到了预期的成像效果。(2)首先通过荧光生色团修饰的二代烷氧醚树枝化基元(G2-C)与α-氯代丙酸酯化反应,制备得到引发剂(G2-C-C1),通过ATRP聚合反应,引发NIPAm单体聚合,成功合成了G2-C-PNIPAM荧光聚合物。使用1HNMR、GPC、FT-IR测定聚合物的化学结构和组成,结合UV-vis和荧光光谱对其紫外吸收和荧光性质做了初步研究。并采用动态光散射(DLS)探索了该荧光聚合物组装体粒径与温度的变化关系。
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