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随着社会经济的不断发展和社交活动的逐渐频繁,嗜酒人群所占比例不断上升,酒精所引发的疾病和问题也日益严重,而消费者对饮酒健康也日益关注,因此醒酒作用的研究以及酒精性肝损伤的预防成为近年来的研究热点。壳寡糖(Chitooligosaccharide,COS)作为天然来源的氨糖低聚物,以其来源广、无毒害、易生物降解、不污染环境,且表现出较强的抗氧化活性和解酒护肝作用越来越受到重视。本课题以壳寡糖为原料,在研究壳寡糖的体外抗氧化活性的基础上,进一步探讨壳寡糖的醒酒作用,进而研究其对急性酒精性肝损伤的保护作用和相关机制,为开发安全有效的护肝产品提供理论支持。论文主要研究内容和结论如下:1.研究了壳寡糖的体外抗氧化活性。分析测定了壳寡糖对羟基自由基(·OH)和DPPH自由基的清除能力。结果表明:壳寡糖对·OH和DPPH清除率都随着浓度的增加而增加,表明其有良好的抗氧化活性。2.研究了壳寡糖的醒酒作用。在建立小鼠醒酒模型的基础上,通过观察小鼠翻正反射消失来判断小鼠是否醉酒。灌酒4 h后处死,测定小鼠血清乙醇、乙醛、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量以及肝脏中乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)含量。结果表明:与酒精模型组相比,壳寡糖低剂量组、壳寡糖中高剂量组、壳寡糖高剂量组的醉酒比例分别下降了14.28%、42.85%、14.28%,壳寡糖低剂量组的醒酒比例达到100.00%,但其余组别醒酒效果不明显;壳寡糖剂量组和模型组相比,其乙醇、乙醛、ALT、AST、ADH含量均显著降低,由此说明壳寡糖有一定的醒酒作用。3.研究了壳寡糖对急性酒精性肝损伤小鼠的保护作用。建立了小鼠急性酒精性肝损伤模型,取小鼠的肝脏进行病理组织学检查,并测定了血清中ALT、AST、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、极低密度脂蛋白(VLDL)含量以及肝脏系数、肝脏中谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)等指标。结果表明:与酒精模型组相比,壳寡糖组小鼠肝脏损伤程度有所减轻,阳性对照组和壳寡糖组血清ALT、AST、TC、TG、VLDL水平均显著降低,肝脏GSH含量和SOD活力均显著增加,而肝脏系数和MDA含量显著降低,表明壳寡糖对小鼠急性酒精性肝损伤有明显的保护作用。4.探讨了壳寡糖对急性酒精性肝损伤具有保护作用的机制。运用实时相对定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot技术检测肝脏中氧化应激及微粒体乙醇氧化酶(MEOS)通路中相关基因和蛋白表达。结果表明:壳寡糖能上调血红素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)的mRNA表达,下调糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的mRNA表达,HO-1和ERK的蛋白水平上也同样体现这点,而且壳寡糖可以促进Nrf2的整体表达,说明壳寡糖对肝脏的保护作用可能与抗氧化基因的诱导有关,同时也可能与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)依赖的氧化应激有关;酒精能显著增加细胞色素P450第二家族E亚型多肽1(CYP2E1)mRNA的表达,而壳寡糖能使CYP2E1表达显著降低,说明可能与CYP2E1依赖的氧化应激有关。