B细胞发育是一个多步骤并受到多因子精确调控的过程,这些因子的突变或表达异常往往导致免疫系统疾病的产生。性联低丙种球蛋白血症(X-linkedagammaglobulinemia,XLA)是一种严重的致死性免疫缺陷疾病,研究表明,Btk基因的突变以及低表达是该病发生的主要因为。BTK是一种典型的胞质非受体酪氨酸蛋白激酶,在调控pro B细胞向pre B细胞发育过程中至关重要。BTK参与多条胞膜受体激活的信号通路,其中B细胞受体(BCR)信号通路研究的较为深入,但关于Btk自身转录调控以及转录后修饰等方面的研究报导甚少。　　 组蛋白乙酰化调节是生物体调控基因转录的一个重要方式,各类组蛋白去乙酰化酶抑制剂在临床上的广泛应用,迫切需要加深组蛋白乙酰化调节对特定致病基因的研究。我们前期研究结果显示组蛋白去乙酰化酶调节Btk的表达,提示Btk可能受到乙酰化调节,为了解Btk表达、激活以及BCR激活B细胞过程中组蛋白乙酰化调节是否参与及其发挥的作用,我们分别在HEK293T、鼠杂交瘤B细胞系T347和激活的原代B细胞中进行了研究。　　 在HEK293T细胞中进行的过表达以及在T347细胞中进行的RNA干扰实验结果显示,组蛋白乙酰化酶p300上调Btk表达,组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)下调Btk表达；ChIP实验结果表明,p300和HDAC1能够被募集到Btk promoter上去,并分别增加和降低其组蛋白乙酰化水平；荧光素酶活性分析实验证明,过表达p300时,Btk promoter活性增强,过表达HDAC1时,Btk promoter活性降低,这些结果证明p300和HDAC1可以影响Btk promoter的组蛋白乙酰化水平,进而调节其转录表达。　　 BTK激活状态以高磷酸化为主要特征,免疫沉淀结果显示p300增强BTK蛋白磷酸化水平,HDAC1降低其磷酸化水平；应用Lyn抑制剂Insolution pp2以及工程细胞株Lyn-/-DT40所进行的实验证明,p300和HDAC1通过Lyn信号通路调节BTK蛋白磷酸化　　 更为有趣的是,体内、体外实验证明,p300能够特异性地识别并乙酰化BTK蛋白；质谱分析结果初步表明BTK蛋白第53位和60位赖氨酸是p300潜在作用位点；CO-IP结果显示BTK和p300存在相互作用。　　 BCR激活的B细胞系统中,Western blotting和Con-focal结果显示,Btk大量表达并且呈现高磷酸化、高乙酰化状态,同时,p300表达明显增加,而Hdac1表达基本不变；酶活性分析表明,B细胞激活后,组蛋白乙酰化酶活性明显增加,而组蛋白去乙酰化酶活性基本不变,这些结果在LPS和OVA激活的B细胞系统中也得到了确证；应用姜黄素(Curcumin)特异性抑制p300时,BCR激活的B细胞系统中,Btk的表达及其蛋白磷酸化、乙酰化水平都不再有意义的改变。这些结果提示,在B细胞激活过程中,组蛋白乙酰化酶表达以及活性水平的增加,对Btk的转录以及转录后修饰具有决定作用。　　 此外,我们检测了组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对Btk表达的影响,结果显示TSA可以导致Btk mRNA的降解,并且这种影响不依赖于其组蛋白去乙酰化酶抑制剂特性。　　 总之,我们的实验结果表明,组蛋白乙酰化调节对Btk的表达以及激活具有重要的调控作用,并且组蛋白乙酰化酶p300能够特异性的乙酰化BTK蛋白,同时发现TSA能够导致Btk mRNA的降解,这些结果揭示了Btk转录以及翻译后修饰的一种新的调节机制,为性联低丙种球蛋白血症的临床治疗提供了一定的理论依据。