人脐带间充质干细胞和乳鼠雪旺细胞复合壳聚糖/NT-3支架材料修复大鼠脊髓损伤的实验研究

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目的:通过酶消化法在体外利用人脐带及乳鼠坐骨神经分离出脐带间充质干细胞和雪旺细胞并进行传代培养和鉴定,在体外与材料复合构建出壳聚糖-NT3细胞复合支架材料,并将其植入构建好的大鼠脊髓横断损伤模型中,通过设置相应的对照组及相关检测指标,检测细胞复合支架材料对大鼠脊髓横断损伤的修复效果。方法:以人脐带为取材来源,采用经典胶原酶消化法分离出脐带间充质干细胞,传代培养,显微镜下观察细胞形态,绘制增殖曲线,用流式细胞仪进行表面抗原鉴定。以SD新生乳鼠的坐骨神经分离出雪旺细胞并传代,以免疫组织化学方法和光学显微镜观察细胞形态进行鉴定。将传代后的脐带间充质干细胞和雪旺细胞与壳聚糖-NT3支架(由暨南大学理工学院提供)复合,构建出细胞复合材料,设计相应的动物实验分组,按分组情况植入相应植入物,经行为学、影像学、组织学等评估脊髓损伤的治疗效果。结果:以酶消化法成功从脐带中分离培养出间充质干细胞,并经细胞形态观察、流式检测鉴定显示所提取细胞均高度表达间充质干细胞的标记(CD73、CD90、CD105)和黏附分子标记(CD54、CD44、CD29、)不表达造血干细胞标记(CD45、CD40、CD34)和人类白细胞抗原标记(HLA-DR),以酶消化法和分级沉淀法成功从乳鼠坐骨神经中分离出雪旺细胞,以光学形态和免疫组织化学染色进行鉴定。构建出材料-细胞复合支架,通过动物实验,并行影像学、组织学、行为学检测表明其对脊髓损伤有较好的修复效果。结论:在体外成功建立了以人脐带及乳鼠坐骨神经来源的间充质干细胞及雪旺细胞的分离培养体系。所得到的细胞纯度高,增殖快,性状稳定,与壳聚糖-NT3支架复合构建的细胞复合支架材料,通过动物实验证实其对大鼠脊髓横断损伤有修复作用。
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