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植物诱导抗病性(Induced Resistance),又称“获得性生理免疫”或者“系统获得抗性”,是指经过生物或非生物因子的诱导处理后,植物对有害病原菌产生抗性的现象。研究发现,许多生物因子(真菌、细菌、病毒及其代谢物等)、物理因子(机械损伤、紫外线、低温和高温处理等)和化学因子(水杨酸、色氨酸等)都能诱导植物产生对病毒、细菌和真菌等的抗病反应。 作为一种性能优良的天然光敏色素,竹红菌甲素(Hypocrellin A,HA)的光敏作用不仅可以用于治疗多种皮肤顽症,而且具有抗癌活性和抑制艾滋病病毒的作用。最近研究发现,胶束体系中的HA无论在光照或者黑暗条件下,对多种农作物病原菌均有较好的抑制效果。目前,对HA在植物诱导抗病性方面的研究尚未见报道。本文以从竹黄中分离纯化的HA作为羟基苝醌类衍生物(Perylenequinonoid Derivatives,PQDs)的代表用于处理试验植物,通过对多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,PPO)、苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia lyase,PAL)、过氧化物酶(Peroxidase,POD)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)四种与植物抗病反应相关酶活性变化研究,并用近年来在大棚黄瓜栽培中危害日趋严重的黄瓜细菌性角斑病(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)作为挑战菌,探讨了HA对黄瓜的诱导抗病效果。 主要结果如下: 1、本文以丙酮作为提取剂,采用索氏提取法与酸碱沉淀法相结合的方法,在465nm处测得纯化后竹黄提取物的HA含量为81%。与柱层析等传统方法相比,本方法可以大大节约试剂、缩短流程、节省时间,可用于从其它天然产物、发酵产物中分离纯化HA,因此具有较大的应用价值。以本方法提取制备的HA粗品,可满足制备绿色农药的需要。 2、HA胶束溶液处理可提高黄瓜叶中与抗性相关四种酶的活性。POD活性提高至峰值的时间最早且提高幅度最大。这些酶活性达到峰值的时间可能与它们在植物体内所起作用的时间有关,也可能与诱导植物体内不同酶基因表达的快慢有关。 3、通过比较不同处理剂量诱导产生的各种酶活性强弱和不同处理剂量植株的病情调查及抗病效果可发现,诱导产生的四种酶活性大小与植株病情、植株抗病效果呈正相关。在7~14d,10ppm处理组植株PPO和POD活性显著高于其他处理组,其抗病效果高达90.48%,可能是PPO和POD催化酚类物质聚合为木质素或氧化为醌,四川农业大学硕士研究生学位论文因而能够抑制病菌生长和减轻发病,从而表现比其他处理组具有较高的抗病效果。 4、在光照条件下,HA可以产生大量的活性氧(Reaetive oxygen SPeeies,ROS).在还原性底物如半肤氨酸酸、抗坏血.酸等存在条件下,HA光敏产生ROS的量子产率大大提高。在植物抵御病原微生物的侵染过程中,ROS发挥了重要的作用,如参与超敏反应、细胞壁的木质化、富含经脯氨酸糖蛋白的交联、诱导表达抗病基因及 POD等病程相关蛋白。因此,我们推测在HA胶束溶液处理黄瓜植株诱导产生抗病性的过程中,ROS可能发挥了关键性作用。