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目前,乳腺癌高居全球女性癌症发病率和死亡率的首位。脂质组学能大规模定性和定量地研究脂类化合物,并了解它们在不同生理、病理条件下的功能和变化。在乳腺癌研究中,脂质组学有助于寻找生物标记物。本课题通过建立高通量的三相萃取-超高效液相色谱(UHPLC)-飞行时间质谱(Q-TOF-MS)分析方法,应用于乳腺癌细胞的非靶向脂质组学分析,筛选出差异脂质,进行差异脂质的代谢途径分析,并探究乳腺癌细胞与脂质代谢的相关性。另外,还将冷冻干燥-在线超临界流体萃取-超临界流体色谱-质谱联用(SFE-SFC-MS/MS)分析方法应用于靶向脂质定量分析。乳腺癌细胞的非靶向脂质组学与靶向脂质定量分析为乳腺癌的诊断与治疗提供新思路。主要内容和结果如下:1.建立了基于三相萃取-UHPLC-Q-TOF-MS技术的脂质组学方法,将该方法应用于两种乳腺癌细胞和正常乳腺细胞的非靶向脂质组学研究,并阐释了相关的脂质代谢通路。使用三相萃取对乳腺癌细胞进行了萃取,并对萃取方法和色谱条件进行了优化。与传统的Bligh-Dyer萃取法和MTBE萃取法相比,三相萃取法能够获得更多的特征峰数目。经验证,该方法的稳定性良好。通过多元统计分析和结构鉴定,在高侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231组和正常乳腺癌上皮细胞MCF10A组之间筛选鉴定出30个差异脂质,在低侵袭性乳腺癌细胞MCF7组和MCF10A组之间筛选鉴定出34个差异脂质。通路分析表明,MDA-MB-231细胞与甘油磷脂代谢通路、花生四烯酸代谢通路及鞘脂亚麻酸代谢通路相关,除以上三种脂质代谢通路外,MCF7细胞也与亚油酸代谢相关。2.建立了冷冻干燥-SFE-SFC-MS/MS在线测定乳腺癌细胞脂质介质的方法。由于超临界流体萃取技术适合分析固体样品,冷冻干燥技术使得含水的细胞样品冻干成粉末,能够应用于在线SFE-SFC-MS/MS系统。本研究系统地考察了冻干条件、取样方法、超临界流体萃取和超临界流体色谱的条件。在优化的条件下,所有脂质介质的校准曲线均显示出良好的线性(R~2>0.99)。检出限和定量限分别在0.190?5.36 pg和0.560?16.2 pg的范围内,回收率在70.3%?125%范围内,精密度的相对标准偏差为1.49%?18.7%,准确度高于84%。与液-液萃取结合LC-MS/MS方法相比,本方法减少了的人工操作,并获得了更高的灵敏度和更高的萃取回收率。最后,内源性脂质介质的定量分析结果显示,乳腺癌细胞中一些炎症相关脂质的水平显著提高,抗炎相关脂质下降。