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目的:中性粒细胞弹性蛋白酶(Neutrophil elastase, NE)是一种由ELANE基因编码的髓性丝氨酸蛋白酶。本研究旨在探讨NE在急性早幼粒细胞白血病(Acute promyelocytic leukemia, APL)细胞增殖和分化中的作用、对APL-NOD/SCID小鼠致病能力的影响及其相关分子机制。
方法:首先,通过收集临床骨髓样本和分析BloodSpot数据库中NEmRNA公共微阵列数据,验证NE在APL患者骨髓和外周血细胞中的表达水平。其次,通过慢病毒转染构建稳定过表达NE的NB4细胞和敲低NE的U937细胞,进而运用CCK-8试验和流式细胞术检测细胞增殖和周期分布,运用IF、CO-IP和Duolink?PLA荧光实验检测NE和p200CUX1的共定位和蛋白相互作用,及运用qRT-PCR和westernblot测定PCNA、Ki-67、CD11b、C/EBPα、C/EBPβ、CyclinD1、CyclinE1、CyclinA2、P21Waf1/Cip1、P27Kip1等增殖分化相关标志物的表达水平,以探讨NE在APL细胞增殖和分化中的作用及其相关分子机制。最后,构建NB4-NE和NB4-NCNOD/SCID小鼠血液瘤模型,通过观察其一般状况、体重变化、生存时间、骨髓和外周血细胞形态、肝脾大小和重量、肝脾白细胞浸润等指标,来评估NE对APL-NOD/SCID小鼠模型致病能力的影响。
结果:NE在APL患者骨髓和外周血中性粒细胞中高表达。过表达NE可以促进NB4细胞的增殖并抑制细胞分化;相反,在U937细胞中,敲低NE或使用NE抑制剂可以减缓细胞增殖并诱导其分化。机制方面,NE与转录因子p200CUX1存在空间上的共定位和蛋白相互作用,可在蛋白水平对其进行有效裂解;而过表达p200CUX1可在一定程度上逆转NE对NB4细胞增殖和分化的影响。另外,NE可增强APL-NOD/SCID小鼠的致病能力,缩短小鼠的生存时间。
结论:NE通过裂解转录因子p200CUX1调控APL细胞的增殖与分化,进而促进该疾病的发生发展。NE有望成为APL新的潜在诊疗靶点。
方法:首先,通过收集临床骨髓样本和分析BloodSpot数据库中NEmRNA公共微阵列数据,验证NE在APL患者骨髓和外周血细胞中的表达水平。其次,通过慢病毒转染构建稳定过表达NE的NB4细胞和敲低NE的U937细胞,进而运用CCK-8试验和流式细胞术检测细胞增殖和周期分布,运用IF、CO-IP和Duolink?PLA荧光实验检测NE和p200CUX1的共定位和蛋白相互作用,及运用qRT-PCR和westernblot测定PCNA、Ki-67、CD11b、C/EBPα、C/EBPβ、CyclinD1、CyclinE1、CyclinA2、P21Waf1/Cip1、P27Kip1等增殖分化相关标志物的表达水平,以探讨NE在APL细胞增殖和分化中的作用及其相关分子机制。最后,构建NB4-NE和NB4-NCNOD/SCID小鼠血液瘤模型,通过观察其一般状况、体重变化、生存时间、骨髓和外周血细胞形态、肝脾大小和重量、肝脾白细胞浸润等指标,来评估NE对APL-NOD/SCID小鼠模型致病能力的影响。
结果:NE在APL患者骨髓和外周血中性粒细胞中高表达。过表达NE可以促进NB4细胞的增殖并抑制细胞分化;相反,在U937细胞中,敲低NE或使用NE抑制剂可以减缓细胞增殖并诱导其分化。机制方面,NE与转录因子p200CUX1存在空间上的共定位和蛋白相互作用,可在蛋白水平对其进行有效裂解;而过表达p200CUX1可在一定程度上逆转NE对NB4细胞增殖和分化的影响。另外,NE可增强APL-NOD/SCID小鼠的致病能力,缩短小鼠的生存时间。
结论:NE通过裂解转录因子p200CUX1调控APL细胞的增殖与分化,进而促进该疾病的发生发展。NE有望成为APL新的潜在诊疗靶点。