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RASGRF2(RAS鸟苷酸释放因子2)是一个富含多结构域蛋白，编码1237个氨基酸，其基因位于人5q13,该区在肺癌中常出现等位基因丢失，因此被认为是一个潜在肿瘤抑制基因。我们前期研究发现RASGRF2在肺癌细胞中存在表达缺失且与异常甲基化有关，在肺癌组织中RASGRF2也存在明显异常甲基化。本课题通过构建RASGRF2-GFP融合基因真核表达载体，转染肺癌细胞并建立稳定表达RASGRF2细胞株，观察过表达RASGRF2对细胞周期的影响，并观察其蛋白的细胞定位，对进一步深入研究RASGRF2基因功能奠定基础。第一部分RASGRF2-GFP融合基因真核表达载体的构建与鉴定。目的：构建带有GFP标签的RASGRF2真核表达载体。方法：将pCMV6-GFP、RASGRF2-pCMV6-Myc-DDK质粒进行SgfI、 NotI双酶切，将RASGRF2基因亚克隆入pCMV6-GFP载体中，构建RASGRF2-pCMV6-GFP重组载体。结果：双酶切与测序证实RASGRF2基因成功克隆到pCMV6-GFP载体中。结论：成功构建了带有GFP标签的RASGRF2真核表达载体，为进一步研究该基因功能提供了工具。第二部分稳定表达RASGRF2肺癌细胞株的建立、细胞定位及功能的初步研究。目的：建立RASGRF2稳定表达的肺癌细胞株、并观察其蛋白细胞定位及其对细胞周期的影响。方法：将pCMV6-GFP、RASGRF2-pCMV6-GFP转染H1299细胞，在倒置荧光显微镜下观察RASGRF2蛋白细胞定位，经G418筛选建立稳定表达RASGRF2肺癌细胞株，经RT-PCR、Western blot检测RASGRF2在稳定细胞株中表达，并将稳定细胞株进行流式检测该基因对细胞周期的影响。结果：RASGRF2-GFP重组蛋白在H1299细胞中成功表达并主要定位于细胞胞质中，稳定细胞株经RT-PCR、Western blot证实RASGRF2在H1299细胞中稳定表达，细胞周期结果显示RASGRF2基因能将细胞周期阻滞在S期。结论：建立了稳定表达RASGRF2基因的肺癌细胞株，对该基因蛋白进行了细胞定位，并发现RASGRF2对细胞周期具有一定的影响，这为进一步深入研究RASGRF2基因在肺癌中的作用奠定了基础。