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随着人口数量的不断增加,生态环境遭到破坏,导致环境中二氧化碳释放量不断的增加,最终全球变暖、臭氧空洞大量形成。因此,紫外线大量的透过空洞,辐射到地球表面。紫外线中的中波长紫外线UVB是主要造成皮肤损伤的紫外线,可以引起皮肤的光老化,造成皮肤损伤。所以保护皮肤免受UVB对皮肤的老化成为目前研究的热点。本研究以两种罗非鱼皮肽TGAGT和LSGTGP为材料,研究其抑制UVB(UltravioletB)诱导HaCaT角质细胞光老化的机制。以不同剂量的UVB辐射HaCaT细胞,通过噻唑蓝比色法(MTT)筛选出导致细胞半数致死量剂量为30 mJ/cm~2,建立了细胞损伤模型;通过MTT法证实两种罗非鱼皮肽TGAGT和LSGTGP在10-100μM的浓度范围内没有细胞毒性,并证实该浓度范围内有对UVB辐射后的细胞活力提高的作用。将两种罗非鱼皮肽分别作用于HaCaT细胞4h再经UVB辐射后培养24h,DNA氧化损伤实验结果表明两种罗非鱼皮肽对UVB辐射后的细胞氧化损伤的DNA具有保护作用;DCFH-DA法实验结果显示两种罗非鱼皮肽对UVB辐射细胞内活性氧(ROS)的产生起到抑制作用,蛋白免疫印迹法(WB)实验结果表明两种罗非鱼肽可以增加Glu和SOD含量的表达,维持细胞内抗氧化的水平;两种罗非鱼皮肽保护由UVB辐射后的HaCaT细胞,通过WB结果表明两种肽经过UVB辐射后,HaCaT细胞中MAPK信号通路中,p38、JNK和ERK蛋白表达量增加,当细胞经罗非鱼皮肽TGAGT保护后,磷酸化的p38和JNK蛋白表达量下降。然而,对ERK的磷酸化没有起到抑制性作用。随着罗非鱼皮肽LSGTGP的浓度升高,磷酸化的p38、JNK和ERK蛋白表答逐渐减少;WB实验进一步证明经两种肽保护后再UVB辐射后,磷酸化的p65和IκB蛋白的表达降低。通过细胞免疫荧光实验结果表明,两种罗非鱼皮肽TGAGT和LSGTGP保护的HaCaT细胞,随着肽浓度的增加,细胞中p65的入核情况逐渐减弱,这一结果直观的说明了两种罗非鱼皮肽能够抑制由UVB辐射HaCaT细胞p65的入核,抑制p65的表达;ELISA实验验证两种肽可以降低受UVB辐射后HaCaT细胞MMP-1和MMP-9的分泌,减少了MMP-1和MMP-9的过度表达,使其不能对胶原蛋白过度的降解,因此对胶原起到了保护作用。同时,两种罗非鱼鱼皮肽还可以提高I型胶原蛋白的含量,提高I型胶原蛋白自我的修复能力。因此,两种罗非鱼皮肽TGAGT和LSGTGP可以减缓因UVB辐射造成的皮肤损伤,对UVB造成的皮肤光老化起到保护的作用;因此,两种罗非鱼皮肽可以抑制通过ROS产生的氧化应激,及其介导的MAPK和NF-κB信号通路,进而控制细胞中的MMPs并提高细胞中胶原蛋白的含量,具有抑制UVB诱导HaCaT角质细胞的光老化作用。