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前言 膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤，其中移行细胞癌约占90％。膀胱癌容易复发且发病率逐年增高，严重危害人们的健康。随着近年来对细胞周期的研究取得一些突破性的进展，细胞周期与恶性肿瘤的发生发展及治疗等方面的关系研究也更加深入，细胞增殖过程中细胞周期素（Cyclin）和细胞周期依赖性激酶（CDK）起着非常重要的作用，而细胞增殖失控是肿瘤组织中最显著的特点。真核细胞周期的调控有赖于CDK的活化，周期素（Cyclin）是CDK的正调节因子，活化CDK活性；CDK抑制剂（CDKI）则是负调节因子使CDK失活。两者对CDK活性的影响控制着细胞周期各时期的转换。P27kip1是新近发现的肿瘤抑制基因，能够抑制CDK从而抑制细胞从G1期到S期的转化，其在细胞周期调控中所起作用已引起广泛的关注。 本课题拟通过免疫组化的实验方法检测膀胱癌中细胞周期依赖性激酶抑制蛋白P27kip1和细胞周期素D1（CyclinD1）的表达情况，分析与肿瘤分期、分级的关系，观察两种蛋白在膀胱癌中表达的相关性。 实验材料 一、标本来源 标本来自中国医大二院（2000.1--2001.4）住院手术患者，其中51例为膀胱癌组织，6例正常膀胱粘膜（取自前列腺增生手术患者）。男性39例，女性12例，年龄范围37-88岁，平均年龄66.6岁。病理分级按WHO标准：Ⅰ级12例，Ⅱ级25例，Ⅲ级14例。临床分期按UICC标准：浅表性膀胱癌Tis～T1期23例，浸润性膀既癌h－T4期28例。 二、实验试剂 鼠抗人P27“’‘抗体、鼠抗人CyClinDI抗体3－P试剂盒山AB底物试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。 实验方法 O)方法：本研究应用免疫组化S－P法，即链霉素亲生物素过氧化酶免疫方法； p)判断标准：以细胞浆或核染成棕褐色为阳性细胞。每张染色切片先用低倍镜O X 10)选择 10个有代表性的视野，再换用高倍镜门0 X 40)计数每一视野中阳性细胞数占所有细胞数的比例＜10％为阴性，＞10％为阳性。 橱)统计学分析：采用 x’检验对各种数据进行统计学分析。 实验结果 P27“”在 BTCC不同临床拥，不同病理分级中表达阳性率差异显著，P＜0．05。CyelinDI在 BTCC不同临床分期，不同病理分级中表达阳性率差异显著，P＜0．05。 讨 论 1994年Pokak等在研究细胞间接触抑制和TGF－p诱导细胞生长停滞于火期的机制时，从静息的细胞提取物中发现了一个27KD的热稳定蛋白质，称为 p吻‘。它具有抑制 CyclinE－CDKZ复合物的活性，对细胞周期具有负调控作用。P27吻‘有47％的氨基酸与 p7相似，位置在 N端并介导对 CDK的抑制作用。p“’‘与m二具有同源性0端的一个60个氨基酸片段中有40％与ul ·2· 一致，内外显子的组织结构与 PZI相似。P27“’‘N端有一个 23个 氨基酸的C端扩展区，含有与CDK磷酸化相同的部分，通过它们 的靶酶在反馈调节中起作用。G；期CDK是一个正性和负性的综 合体，决定着细胞是否自主进人细胞周期，其中一个因素是CDK 蛋白水平，另一个是 CDK抑制蛋白的变化。P27“PI正是一种抑制 蛋白。正常情况下 P27“’‘在 GO－G；期时表达增高，当细胞进人 S 期时则表达下降。P27“’‘在纤维母细胞中表达增高时，可使细胞 停滞于 G；期。反义 P27“’‘在抑制 P27…‘在中国仓鼠肺纤维母细 胞中表达的同时可提高CyclinDI、CyclinA和二氢叶酸还原酶的 转录，启动DNA的合成。P27吻‘基因转染细胞的过量表达可使细 胞DNA合成强烈受抑，阻止其从Gl期进人S期。动物实验证实 P27“’‘的LM区域被破坏将导致：小鼠生长加速，表现为细胞数目 增加，增殖旺盛，尤其是在P27…‘高表达的组织；小鼠垂体中叶呈 结节状增生，但无激素量的增加，P27“’‘功能的丧失可导致细胞出 现增生方向的改变。以上结果均证明 P27“’‘在细胞周期调控中的 重要作用。 CharleS等应用免疫组化方法测定原发性乳腺癌的nw‘蛋 白水平，在56例高分化乳腺癌中有化例u0％)显示高表达，在 84例中桃乳腺癌中有56例（67％）显示低表达，在28例低分化 乳腺癌中有 27例万6．5％)显示低表达。在乳腺癌进展中 P27“’‘ 蛋白的减少起重要作用，与肿瘤的分级有关，是一个独立的诊断指 标。Sandhu等研究了50例膀眺移行细胞癌，3例转移型淋巴结和 7例正常膀脱级膜，同样发现P27的表达在BTCC不同临床分期。 不同病理分级中表达阳性率差异显著，检测认为低表达的p7“’‘ 对于膀脱癌的进展起重要作用。本研究也发现m7表达与膀肤 癌的分级呈负相关，分级越高，R对表达越低。因此，认为E对有 可能作为判别膀既癌分化程度的标志物。 CyClinDI是目前发现的8种细胞