【摘 要】
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目的:小鼠胎儿成纤维细胞和卵丘细胞是两种重要的核移植供体细胞。本实验采用不同浓度(0、0.5、5、50和100nM)的曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)处理这两种细胞,分别观察TSA.对
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目的:小鼠胎儿成纤维细胞和卵丘细胞是两种重要的核移植供体细胞。本实验采用不同浓度(0、0.5、5、50和100nM)的曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)处理这两种细胞,分别观察TSA.对其细胞核组蛋白H3-K9乙酰化水平的影响。
方法:1、断颈处死14.5天的胎鼠,培养第3代的胎儿成纤维细胞,用不同浓度(0、0.5、5、50和100nM)的TSA处理之后,采用免疫荧光细胞化学(Immunofluorescence cytochemistry)和蛋白质印迹(Western blot)方法对细胞核组蛋白H3-K9乙酰化水平进行检测和分析。2、超数排卵后的雌性成熟小鼠,培养原代卵丘细胞,用不同浓度(0、0.5、5、50和100nM)的TSA处理之后,采用免疫荧光细胞化学的方法对组蛋白H3-K9乙酰化水平进行检测和分析。
结果:1、用不同浓度的TSA处理48h后的胎儿成纤维细胞,当TSA浓度达到50nM和100nM时,细胞核组蛋白H3-K9乙酰化荧光强度比对照组明显增强。Western blot方法检测发现,随着TSA浓度的不断提高,细胞核组蛋白H3-K9乙酰化表达增强,且呈剂量依赖性。2、TSA处理后的卵丘细胞,随着TSA浓度的逐渐提高,组蛋白H3-K9乙酰化荧光强度随之增加。尤其在TSA浓度达到100nM时,组蛋白H3-K9乙酰化荧光强度最强。
结论:用TSA处理小鼠胎儿成纤维细胞和卵丘细胞后,能够提高这两种细胞核组蛋白H3-K9乙酰化水平,将有助于提高其核移植重编程的能力。
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