新疆药桑叶多糖提取分离纯化及降血糖活性的研究

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目的:研究新疆药桑叶中多糖的最佳提取工艺;并对药桑叶多糖进行分离纯化;研究药桑叶多糖的性质,单(多)糖的组成及降血糖活性。方法:1.采用正交试验法确定药桑叶多糖的最佳提取工艺。2.采用DEAE-52、Sephadex G-200对最佳提取工艺条件下得到的药桑叶多糖进行分离纯化,测定其相对分子量。3.研究分离纯化后多糖组分的理化性质,采用TLC法对其单糖组成进行初步分析,并用UV、IR对得到的多糖化合物进行初步分析。4.采用GC进一步确定多糖中单糖的组成。5.建立四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠模型,观察药桑叶多糖对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖及肝糖原的疗效,并分析其可能的作用机制。结果:1.确定新疆药桑叶多糖的最佳提取工艺为:提取温度100℃、提取时间3h、醇沉浓度为80%、料液比1:20、提取2次、料液pH=7.0。2.采用最佳提取工艺提取的粗多糖,经Sevage法和三氯乙酸法除蛋白比较发现,Sevage法除蛋白效果较好。粗多糖经过DEAE-52分离得到6个多糖组分W1、W2、N1、N2、N3和N4,其中4个组分W1、N1、N2和N4经过Sephadex G-200纯化后,其洗脱峰均为单一对称峰。测定出多糖分子量在21374~71331之间。3.多糖组分均不含核酸和蛋白质并初步判断出其组成的单糖为α-吡喃糖。4.通过GC分析得出W1为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖六种单糖组成,摩尔组成比例为7.16:9.59:1.09:1.05:12.36:15.52;N1是由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖四种单糖组成,摩尔组成比例为5.25:5.76:9.28:11.66;N2、N4主要由葡萄糖和半乳糖两种单糖组成,摩尔组成比例为3:4左右。5.药桑叶多糖能降低糖尿病小鼠血糖浓度,缓解四氧嘧啶型小鼠胰岛β细胞损伤,促进肝糖元的合成等作用。结论:1.通过验证试验得出多糖提取率的结果与正交实验结果接近,说明该工艺稳定可行。2.分离纯化后的药桑叶多糖洗脱峰均为单一对称峰,初步可以判断所得组分较纯;对其分子量测定,为多糖进一步结构分析奠定基础。3.紫外扫描可知多糖组分不含蛋白质核酸,说明除蛋白较完全;TLC法初步判断出药桑叶多糖组分中单糖的组成;IR初步确定了药桑叶多糖中存在的特征官能团。4.明确多糖中单糖的摩尔组成是研究多糖构型的重要前提,通过GC分析得出4个多糖组分的摩尔组成比例。5.初步可以说明新疆药桑叶多糖能降低血糖值。
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