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第一部分目的:通过构建靶向Survivin的shRNA真核表达载体的方法来探讨RNAi技术对鼻咽癌细胞生长抑制作用，为鼻咽癌的基因治疗提供新的实验依据。方法:以凋亡抑制基因Survivin为靶位，构建表达小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体，经脂质体转染鼻咽癌细胞系CNE-2，应用RT-PCR检测鼻咽癌细胞中SurvivinmRNA表达抑制情况，初步鉴定干扰效果。结果:重组载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA1,2,3,4,N经双酶切和基因测序检测,证实碱基序列与模板序列相符，无基因突变，载体构建成功。重组载体经脂质体Lipofectamine2000介导转染鼻咽癌细胞，细胞发生不同程度凋亡，转染效率约为55%。RT-PCR方法初步鉴定其干扰效果，以Survivin/GAPDH的相对表达来表示SurvivinmRNA的变化,各组的mRNA表达相差较大，24h测得的mRNA相对于转染前有一定下降，大约在50%左右；但是随着时间延长，重组质粒的干扰作用逐渐减弱。结论：本实验通过构建靶向Survivin的shRNA真核表达载体的方法，经脂质体介导，转染鼻咽癌细胞系CNE-2，在一定程度上抑制细胞中Survivin的基因表达水平。证实了应用RNAi技术对鼻咽癌细胞生长有一定程度的抑制作用，并为鼻咽癌的基因治疗提供了新的实验数据。第二部分目的：通过化学合成的小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)的方法来探讨RNAi技术对鼻咽癌细胞生长抑制作用，为鼻咽癌的基因治疗提供新的实验依据。方法：根据siRNA的设计原则设计针对survivin基因序列特异性的siRNA，在脂质体介导下转染CNE-2细胞。采用RT-PCR和Westernblotting检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况，并筛选出干扰效果最好的siRNA序列进行细胞生长抑制试验（CCK-8实验）检测对细胞生长抑制作用。结果：转染siRNA24h、48h和72h后，用RT-PCR和Westernblotting检测，CNE-2Z细胞survivin表达明显下降，并筛选出抑制效果最好1号序列进行CCK-8实验，结果显示能明显抑制细胞生长增殖。结论：靶向Survivin的siRNA转染人鼻咽癌CNE-2细胞有效抑制细胞中Survivin基因的表达水平，并对细胞生长增殖等生物学行为产生抑制作用。证实了应用通过化学合成的siRNA的RNAi技术对鼻咽癌细胞生长有显著的抑制作用为鼻咽癌的基因治疗提供了新的实验数据。