论文部分内容阅读
目的:CIK细胞对肺腺癌A549/DDP细胞株的影响观察。方法:取健康人外周血,应用密度梯度离心法分离单个核细胞,在体外使用IFN-1、IL-1、IL-2和人抗CD3单抗对PMBC进行诱导培养,使其增殖和成熟,分化为CIK细胞。应用徕卡显微系统观察CIK细胞、A549/DDP细胞的形态学特征。成熟的CIK细胞与A549/DDP细胞共同培养,根据CIK细胞作用于A549/DDP细胞靶比浓度的不同将实验分为为4组:40:1靶比组、20:1靶比组、10:1靶比组和无CIK细胞作用的对照组,然后观察各组的形态学变化。另将实验分为5组:A549细胞组、A549/DDP细胞组、A549/DDP细胞-IL2培养组、CIK细胞作用于A549/DDP(10:1)组、单纯CIK组,运用RT-PCR、RQ-PCR和蛋白印迹Western blot技术观察各组基因(mdr-1、mrp、gst-π)和蛋白(P-gP、MRP、GST-π)的表达情况。结果:体外培养的CIK细胞悬浮生长,均匀分布,细胞体积小,呈圆形或椭圆形;体外培养的A549/DDP细胞贴壁生长,细胞体积大,呈多边形,桑椹样生长。CIK细胞和A549/DDP细胞共培养时,CIK细胞能明显影响A549/DDP细胞的生长,具有很强的杀伤效应。在靶比10:1的情况下即可观察到A549/DDP细胞生长状况不佳,在高效靶比40:1情况下,绝大部分A549/DDP细胞死亡。同时RT-PCR和RQ-PCR检测显示mdr-1、mrp和gst基因都参与了A549/DDP细胞对顺铂的耐药;在CIK细胞作用下,A549/DDP细胞耐药基因mdr-1、mrp和gst的表达均明显下调;Western blot结果显示耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)和谷胱苷肽转移酶-π(GST-π)也都参与了A549/DDP细胞对顺铂的耐药;在CIK细胞作用下,A549/DDP细胞的耐药蛋白P-gp、 MRP和GST-π的表达也明显降低。结论:CIK细胞能明显抑制耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞的生长,攻击杀伤A549/DDP细胞;mdr-1、mrp口gst基因和蛋白都参与了A549/DDP细胞对顺铂的耐药;同时,CIK细胞能降低A549/DDP细胞中重要的耐药基因和相关蛋白的表达,提示CIK细胞可能通过下调mdr-1、mrp和gst基因和蛋白的表达来逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性。