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目的1.通过检测VEGF在胃癌组织中的表达,以及不同浓度VEGF对AGS细胞增殖的影响,评价VEGF在胃癌增殖中的作用。2.通过检测不同浓度VEGF对AGS细胞中MMP-9mRNA表达的影响,以及不同浓度VEGF对AGS细胞中MMP-9蛋白表达的影响,评价VEGF在MMP-9的表达中的作用。3.通过分析VEGF在胃癌增殖中的作用,以及VEGF在上调MMP-9的表达中的作用,探讨VEGF和MMP-9在胃癌侵袭转移中的相互作用,为研究胃癌侵袭转移的具体机制提供实验依据。材料和方法1.标本来源：收集2007年8月至2009年5月山东大学齐鲁医院胃癌手术切除标本40例及癌旁组织10例作正常对照组。每个病例均经手术和病理证实,且术前均未接受过放、化疗。2.细胞培养及分组：胃癌细胞系AGS用含10%胎牛血清和双抗(青霉素、链霉素各100U/ml)的RPMI-1640培养液在37°C、5%CO2温箱中培养。取对数生长期AGS细胞,当细胞长至80%满时,用0.25%胰蛋白酶消化,吸管反复吹打制成单细胞悬液,调整细胞浓度为2.5×105·mL-1,每孔200ul接种于96孔板,培养AGS细胞24 h。待细胞贴壁后,换成VEGF终浓度不同的培养液,共分为4组：正常对照组(含10%胎牛血清RPMI-1640培养液)及培养液分别含10、30、及50 ng·ml-1 VEGF的浓度组,即A组、B组和C组,每组6孔。3.实验方法：免疫组织化学染色,观察胃癌组织及正常胃黏膜组织中VEGF的表达；MTT法,检测不同浓度VEGF对胃癌AGS细胞增殖的影响；实时定量PCR,检测不同浓度VEGF对AGS细胞中MMP-9mRNA表达的影响；Western blot,检测不同浓度VEGF对AGS细胞中MMP-9蛋白表达的影响。4.统计学分析：应用SPSS16.0统计软件进行分析。组间阳性率及表达强度的比较采用Chi-square Test,必要时用Fisher精确概率法。其余数据以均数+标准差表示,进行单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果1. VEGF主要在癌细胞中呈阳性表达,在血管内皮细胞及一些上皮细胞也有弱阳性表达,而正常组织无阳性表达。40例胃癌组织阳性率为85.0%,10例癌旁组织阳性率为40.0%,具有统计学意义(P<0.05)。2.各实验组AGS细胞随着VEGF浓度的增加,增殖程度相应增加；对照组、A组、B组和C组的OD值经方差分析后分别为0.225±0.015、0.263±0.019、0.324±0.020、0.352±0.020,具有统计学意义(P<0.05)。3.各实验组AGS细胞随着VEGF浓度的增加,MMP-9mRNA表达量相应增加；对照组、A组、B组和C组的相对荧光值分别为0.253±0.040、0.358±0.070、0.939±0.080、1.087±0.060,具有统计学意义(P<0.05)。4.各实验组AGS细胞随着VEGF浓度的增加,MMP-9蛋白表达量相应增加,与MMP-9mRNA表达变化一致。结论1.本研究通过免疫组化检测发现VEGF在胃癌组织中高表达；通过MTT法证实VEGF能促进AGS细胞的增殖,综合上述研究,可推断VEGF参与胃癌的发生发展。2.通过荧光定量PCR及Western blot检测,我们发现VEGF明显促进了AGS细胞MMP-9 mRNA及蛋白的表达,由此我们推断,VEGF可能通过促进MMP-9表达,促进了胃癌的侵袭转移。3. VEGF和MMP-9之间相互作用的具体机制有待进一步研究。对VEGF和MMP-9进行深入研究,必将有助于预测胃癌的复发转移及预后。