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狂犬病（rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的侵中枢神经系统（CNS）的一种人兽共患病。一旦感染发病,死亡率几乎为100%。目前没有有效的治疗措施,暴露前后免疫是预防该病的主要途径,因此研发出高效而低成本的疫苗尤为重要。IL6（Interleukin 6）是一种高度多功能的细胞因子,不仅在免疫细胞中,而且在其他细胞如中枢神经系统细胞中具有多效性作用。IL12（Interleukin 12）通过促进Th1型细胞因子应答,增强NK/LAK细胞裂解活性,增强特异性CTL应答,并诱导IFN-γ产生,而促进细胞介导的免疫反应。为了探索IL6和IL12同时在狂犬病病毒中过表达对病毒生物学特性的影响,本研究选用重组病毒rHEP-dG,rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12进行研究。接着对重组病毒rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12的生物学特性进行研究。结果显示,两毒株都可以在NA细胞上稳定增殖,且培养滴度都高于亲代病毒rHEP-dG。抽提第11代rHEP-dG-CaIL12和第7代rHEP-dG-CaIL6-12病毒的RNA,扩增IL12和IL6基因,未发现突变。病毒的生长曲线显示,当MOI=0.01时,rHEP-dG-CaIL12、rHEP-dG-CaIL6-12和rHEP-dG保持着相似的生长特性;当MOI=1时,rHEP-dG-CaIL6-12在任何时间点的滴度都明显高于rHEP-dG。扩散实验和病毒对细胞的活性实验显示,从48 h开始,rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12的扩散能力强于rHEP-dG;第4 d,rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12病毒组细胞活性低于rHEP-dG。对NA细胞的凋亡实验显示,rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12都抑制细胞凋亡。western blot结果显示两毒株（rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12）M蛋白和G蛋白表达量前期第2d低于rHEP-dG,而后期第3d rHEP-dG-CaIL12高于rHEP-dG。荧光定量PCR实验显示,rHEP-dG-CaIL12病毒基因组RNA水平高于rHEP-dG。当MOI=0.01时,各结构基因的mRNA水平呈现出动态变化,当MOI=1时,rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12在感染初期0.5d各结构基因的mRNA水平低于rHEP-dG,0.5d后显著高于rHEP-dG。致病性实验显示,狂犬病病毒rHEP-dG、rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12对6-7周龄的成年小鼠都无致病性且对体重的影响无显著性差异。3日龄乳鼠的LD50实验中,rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12的致病性均要低于rHEP-dG。免疫原性实验显示,三株重组病毒免疫的小鼠都能产生抗狂犬病的抗体。攻毒保护实验显示,对颅内注射三株病毒21 d后诱导的抗体抵抗狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-24攻击的小鼠保护率为100%,肌肉注射病毒60 d后诱导的抗体抵抗CVS-24攻击的小鼠保护率均为80%。综上所述,重组狂犬病病毒rHEP-dG-CaIL12和rHEP-dG-CaIL6-12的滴度提高,复制能力、转录水平和蛋白的表达发生不同程度的变化,病毒接种3日龄乳鼠其致病性降低,具有作为新型基因工程疫苗的潜质,本研究为犬的新型狂犬疫苗的研制奠定了基础。