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酒文化在我国有着悠久的历史,因而相当多的中国人有饮酒的嗜好。然而,长期饮酒、饮酒过度引发的健康问题也愈来愈受到人们的关注。为了更好地在传承文化与保护健康之间取得平衡,目前市场上已出现相关的解酒药和解酒保健品,主要依据中医学上的疏经活血、养肝护脾。而已有的研究表明,体内乙醛脱氢酶2(ALDH2)酶活性减弱才是饮酒者出现不适症状的关键。因此,上述的解酒方法仅为治标。如何利用基因工程的方法,大量体外发酵纯化高酶活性的ALDH2,最终开发为解酒酶制剂才是治本之道。基于原核载体表达真核基因时,目的蛋白的表达量大,但宿主菌由于缺少相关蛋白质体内修饰加工机制,表达的目的蛋白一般不能正确折叠并丧失一些功能。本论文围绕pET32a-ALDH2重组菌发酵表达ALDH2的工艺改进、金属离子对ALDH2酶活性的影响、人工胃液/胰液对ALDH2的降解作用、防腐剂对ALDH2酶活性的维持、酶液贮存条件等进行了研究,旨在开发一款最适的、高效的用于解酒功能的乙醛脱氢酶2(ALDH2)商品化剂型。首先,通过拓展ALDH2包涵体在透析复性时的处理工艺,发现低浓度磷酸盐缓冲液较正常浓度的磷酸盐缓冲液可以显著提高ALDH2酶液的酶活性。同时,酶液经真空冷冻干燥处理后,酶活性丧失比较明显。因而,ALDH2商品化剂型优先考虑液态制剂。其次,通过研究常见金属离子对ALDH2酶活性的影响,发现除Na+外,K+、Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+均能在不同程度上提高ALDH2的酶活性。双因素金属离子对ALDH2酶活性的影响效应则既有促进也有抑制,综合考虑,K+是最佳的ALDH2酶活性促进剂。ALDH2在模拟的胃液中,能够稳定存在90min而不被降解,说明ALDH2可以耐受胃蛋白的分解作用,从而降低后续ALDH2液态剂型的设计难度,增加了该剂型的现实可能性。但是,ALDH2在模拟的胰液中迅速被分解,预示胰蛋白酶可以分解ALDH2。考虑到药物代谢动力学的复杂性,以及体外模拟与体内实际环境的差异性,ALDH2有望主要在胃液中发挥作用,在胰液中短暂停留,最后被分解。随后,本论文还对防腐剂山梨酸钾对ALDH2酶活性维持的影响进行了研究。结果发现,添加有酶活性促进剂K+、防腐剂山梨酸钾的ALDH2酶液,酶活性保持率较单纯添加酶活性促进剂K+的ALDH2酶液高,表明山梨酸钾在一定程度上可以维持ALDH2酶活性。最后,论文对拟定的ALDH2液态剂型的贮存条件也进行了研究。实验中,分别将添加有K+和山梨酸钾的ALDH2酶液实验组、单纯添加K+的ALDH2酶液对照组,同步贮存于-20℃、4℃、30℃下一个月,通过检测酶活性变化发现,-20℃下实验组酶活性几乎无损失,效果最好,预示该ALDH2剂型在-20℃下至少能贮存一个月。同时,以上几个方面的研究结果表明本论文设计的ALDH2液态剂型具有一定的现实可行性。