【摘 要】
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芍药(Paeonia lactiflora Pall.)为芍药科(Paeoniaceae)芍药属(Paeonia L.)多年生草本植物,以根入药,可用作中药白芍和赤芍。四川省中江县为中药白芍的道地产区和主要栽培区之一,所产白芍又称“川白芍”,品质极佳,扬名国内外。但四川栽培芍药(川芍药)由于雄蕊完全瓣化只开花不结实,不能进行种子繁殖,只能进行无性繁殖,繁殖系数低,难以满足市场需求。因此,本研究以川
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芍药(Paeonia lactiflora Pall.)为芍药科(Paeoniaceae)芍药属(Paeonia L.)多年生草本植物,以根入药,可用作中药白芍和赤芍。四川省中江县为中药白芍的道地产区和主要栽培区之一,所产白芍又称“川白芍”,品质极佳,扬名国内外。但四川栽培芍药(川芍药)由于雄蕊完全瓣化只开花不结实,不能进行种子繁殖,只能进行无性繁殖,繁殖系数低,难以满足市场需求。因此,本研究以川芍药为材料,对川芍药组织培养中污染控制方法、丛芽诱导以及无根组培苗的培养条件进行研究。本文主要研究结果如下:1.外植体表面消毒方法优化:通过考察多菌灵和青霉素钠混合溶液处理以及75%酒精和0.1%升汞处理时间对川芍药叶片、着生鳞片的茎段、无节结茎段和分叉茎段污染率和坏死率的影响。研究发现叶片最佳表面消毒处理为:经3 g/L多菌灵和0.5 g/L青霉素钠混合溶液浸泡60 min后用75%酒精处理10 s,0.1%升汞处理7 min,其污染率为41.67%,坏死率为8.3%;着生鳞片的茎段、无节结茎段、分叉茎段的最佳表面消毒处理均为:经5 g/L多菌灵和1 g/L青霉素钠混合溶液浸泡60 min后用75%酒精处理10 s,0.1%升汞处理8 min,其污染率分别为47.2%、47.23%和47.2%,坏死率分别为4.67%、5.6%和5.57%。2.内生菌污染的控制:表面消毒后川芍药在组织培养过程中出现的内生菌污染经分离纯化和鉴定,主要为无色杆菌(Achromobacter sp.)、甜瓜黄单胞杆菌(Xanthomonas melonis)、荧光假单孢杆菌(Pseudomonas fluorescens)和透明黄单胞杆菌(Xanthomonas translucens)。以着生鳞片的茎段、无节结茎段、分叉茎段为外植体,向培养基中添加0.15 g/L益培灵,其污染率依次为34.27%、33.33%、32.43%,坏死率依次为6.5%、10.17%、8.3%。3.川芍药丛芽的诱导及无根组培苗的培养:在叶片、着生鳞片的茎段、无节结茎段和分叉茎段这四种外植体中,仅着生鳞片的茎段在1/2MS+2.5 mg/L TDZ的培养基中诱导出单个芽。以着生鳞片的茎段为外植体,其最适丛芽诱导条件为:1/2MS+2.5 mg/L TDZ暗培养一周后转入1/2MS+3 mg/L TDZ培养基中光照培养能诱导形成丛芽;无根组培苗培养的适宜培养条件为1/4MS+10 g/L蔗糖。
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