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背景:巨噬细胞是参与固有免疫的重要细胞,根据不同的微环境信号而表现出极高的可塑性是巨噬细胞重要的生物学特点。肿瘤组织招募外周循环中的单核细胞后,诱导其成为肿瘤相关巨噬细胞,主要表现出M2型巨噬细胞的极化特点和功能特点,是参与肿瘤免疫逃逸的重要机制,也被认为与非霍奇金淋巴瘤肿瘤发生有着密切关系。而机体参与肿瘤免疫逃逸的另一关键所在是以PD-1为代表的免疫检查点。PD-1主要表达于活化的T细胞表面,但在B细胞、NK细胞、巨噬细胞、DC细胞表面均可表达。PD-1的表达具有抑制T细胞活化和活性的作用。但其在巨噬细胞表面表达所带来的影响尚未能完全理解。通过某些疾病模型,我们发现PD-1阳性的巨噬细胞的抗炎功能出现缺损,从而促进免疫逃逸;PD-1阳性单核细胞的增多,会促进单核巨噬细胞分泌IL-10,造成巨噬细胞功能紊乱。PD-1阳性的肿瘤相关巨噬细胞比例可能随着肿瘤分期的进展而增加,同时巨噬细胞表面PD-1的表达会抑制巨噬细胞吞噬功能。基于以上理论,我们试图通过检测非霍奇金淋巴瘤患者病理组织中肿瘤相关巨噬细胞与PD-1的共表达情况,并初步探索PD-1表达水平对非霍奇金淋巴瘤中肿瘤相关巨噬细胞功能的影响。目的:探究外周T细胞淋巴瘤患者病理组织中TAMs表型与PD-1的共表达情况;初步探索PD-1表达水平对非霍奇金淋巴瘤中肿瘤相关巨噬细胞极化、细胞因子分泌和吞噬功能的影响。方法:1.收集17例初治PTCL患者的病理组织标本,利用多色免疫荧光染色技术检测其病理组织中TAMs相关标记(CD68、CD206)和PD-1的表达情况;2.利用慢病毒转染技术构建PD-1高表达THP-1细胞株(OE组);3.利用M1型细胞因子、M2型细胞因子、淋巴瘤细胞株(Jurkat细胞系、Raji细胞系)通过直接或间接的方式刺激PD-1高表达和PD-1表达野生型的THP-1细胞后,利用流式细胞术检测细胞表面M1型(CD68、CD192)和M2型(CD206、CD163)的表达情况;利用ELISA方法检测细胞上清中IL-10和IL-12的分泌水平;利用流式细胞术检测BSA-FITC荧光表达比例检测巨噬细胞相对吞噬率。结果:1.PTCL患者病理组织中TAMs表型与PD-1共表达情况:(1)送检的PTCL患者肿瘤病理组织中CD68/PD-1双阳性率为0.99%(范围为0.01%～17.51%),阳性个数为21.76个/百万像素(范围为0.25～426.5个/百万像素),CD206/PD-1双阳性率为0.38%(范围为0～23.88%),阳性个数为8.72个/百万像素(范围为0～488.4个/百万像素),T-NHL患者病理组织中巨噬细胞表型(CD68、CD206)与PD-1表达双阳性的异质性极大。(2)Ann Arbor分期与病理组织中CD206/PD-1双阳性率及双阳性个数呈正相关关系(相关系数为0.427,p=0.038)。但与CD68/PD-1双阳性率无显著相关性(p=0.062),IPI评分与CD206/PD-1双阳性表达情况(p=0.092)及CD68/PD-1双阳性表达情况(p=0.155)均无显著相关性2.利用PD-1高表达THP-1细胞株验证PD-1表达水平对NHL中巨噬细胞功能影响(1)M1型细胞因子刺激后,PD-1高表达THP-1细胞表面M1相关标记均显著低于PD-1表达野生型THP-1细胞株(OE/MOCK组:CD68 23.5%vs 65.67%;CD192 28.1%vs 55.43%;CD68+/CD192+7.8%vs 40.07%,p<0.001);M2型细胞因子刺激后,PD-1高表达THP-1细胞株表面M2相关标记也显著低于PD-1表达野生型细胞株(OE/MOCK:CD206 58.38%vs 80.7%,p<0.001;CD163 7.37%vs 10.4%,p=0.049;CD206+/CD163+4.31%vs8.68%,p=0.003)。在细胞因子刺激下,PD-1高表达THP-1细胞较PD-1表达野生型细胞,其吞噬功能明显下降(M1组:OE/MOCK 13.3%vs 72.5%;M2 组:OE/MOCK 10.4%vs 64.17%;p<0.001)。(2)受到Jurkat或Raji淋巴瘤细胞细胞因子刺激后,PD-1高表达THP-1细胞株表面M1型相关标记均发生均明显低于PD-1表达野生型细胞(OE/MOCK 组:CD68 18.7%vs 62.57%;CD192 22.37%vs 38.03%;CD68+/CD192+ 5.1%vs 25.87%,p<0.001),但 M2型相关标记下降幅度较低或无显著性变化(OE/MOCK:CD206 60.35%vs 75.93%,p<0.001;CD163 8.77%vs 7.19%,p=0.156;CD206+/CD163+ 5.91%vs 5.99%,p=0.924)。此外,PD-1高表达细胞株吞噬功能较PD-1表达野生型减弱(OE/MOCK:6.7%vs 41.1%,p<0.001)。(3)THP-1细胞与Jurkat或Raji淋巴瘤细胞直接接触培养后,PD-1高表达THP-1细胞株表面M1型相关标记均较PD-1表达野生型细胞显著性下降(OE/MOCK 组:CD68 19.83%vs 54.77%,p=0.002;CD 192 55%vs 69.23%,p=0.04;CD68+/CD192+ 12.27%vs40.07%,p<0.001),但 M2 型相关标记下降幅度小或变化不明显(OE/MOCK:CD206 71.73%vs75.93%,p<0.001;CD163 3.03%vs 7.19%,p=0.076;CD206+/CD163+ 2.3%vs 5.99%,p=0.024);OE 组细胞分泌更多的 IL-10(OE/MOCK:144.03pg/mlvs 32.33pg/ml),但其分泌IL-12的能力与MOCK组无显著差异(OE/MOCK:33.96pg/mlvs30.72pg/ml);此外,PD-1高表达THP-1细胞的吞噬功能受到更显著的抑制(OE/MOCK:4.42%vs40.7%,p<0.001)。结论:1.PTCL患者病理组织中TAMs表型与PD-1共表达情况异质性极大,其中CD206/PD-1双阳性率及双阳性细胞个数与Ann Arbor分期显著正相关,提示其潜在的预后分层价值;2.PD-1在巨噬细胞表面高表达会抑制其向M1型巨噬细胞转化,但对其向M2型巨噬细胞转化的能力无明显抑制,在淋巴瘤细胞刺激下,PD-1高表达巨噬细胞分泌IL-12的能力受到明显抑制,但较PD-1表达野生型巨噬细胞分泌更多的IL-10;巨噬细胞表面PD-1高表达会抑制巨噬细胞自身吞噬功能。