盐肤木果实提取物预防小肠结肠炎的作用及其机制研究

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盐肤木是一种药食同源的植物,其果实可用于生产食品调味品、天然醋和食用油,其果实、根、茎、叶和五倍子也可用于预防或治疗一些疾病,如炎症、腹泻、疟疾和其他急慢性肠道疾病。目前,未见盐肤木果实预防小肠结肠炎方面的研究。为进一步研究盐肤木果实的生物活性,本实验采用80%乙醇溶剂提取得到盐肤木果实乙醇提取物(RM),研究RM对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)和新生幼鼠的坏死性小肠结肠炎(NEC)的预防效果和作用机制,并利用小鼠肠道微生物体外发酵模型对RM进行厌氧发酵,分析RM中酚类物质和抗氧化活性的变化。本文的主要研究结果如下:(1)UHPLC-ESI-HRMS/MS分析表明,RM中富含酚类物质,其中没食子酸和槲皮素-3-O-鼠李糖苷的含量最高。该提取物,尤其是高剂量(600 mg/kg)提取物,对DSS诱导的小鼠UC有明显的预防效果。结果表明,提取物能明显降低DSS诱导小鼠的疾病活动性指数,维持正常的脾脏状态,改善结肠组织病理学和结肠长度,调节TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA、MPO、SOD和GSH的水平。该提取物通过提高ZO-1、Occludin和Claudin-1的表达水平明显保护了肠道屏障的完整性。进一步研究表明,该提取物对DSS诱导的UC的预防作用可能是通过上调几个关键的氧化应激相关蛋白Nrf2、NQO1和HO-1的表达,下调几个关键的炎症相关蛋白p-NF-κB、p-IκB、COX-2、i NOS、p-P38、p-Erk1/2、p-JNK的表达来实现的。因此,盐肤木果实对DSS诱导的小鼠结肠炎具有良好的预防效果。(2)在幼鼠NEC实验中,该提取物,尤其是高剂量提取物(400 mg/kg),对幼鼠NEC有明显的预防作用。提取物能明显降低NEC幼鼠的死亡率和临床疾病评分,改善肠道宏观状况和组织病理学损伤,显著降低肠道组织中TNF-α、IL-6、TOS、MDA和MPO水平,提高TAS、SOD和GSH-Px水平。提取物还提高了ZO-1和Occludin的表达来维持肠道屏障的完整性。进一步的分析表明,该提取物可能通过下调TLR4、p-NF-κB、i NOS、cleaved Caspase-3和Bax的表达水平,上调Bcl-2、NQO1和Nrf2的表达水平来改善肠上皮细胞的氧化应激、炎症和凋亡反应。因此,盐肤木果实可以有效预防新生幼鼠NEC。(3)在小鼠肠道微生物体外发酵实验中,RM中酚类的种类和抗氧化活性稳定,酚类物质的含量发生了较大的变化。不同发酵时间的RM共检测出13种物质,包括1种有机酸和12种酚类化合物,其中没食子酸的含量最高,其次是槲皮苷-3-O-鼠李糖苷和杨梅素-3-O-鼠李糖苷。在体外发酵过程中,RM中酚类物质的含量发生了较大的变化并呈现不同的变化趋势,这可能是由于多酚的结构不同影响其生物利用度。另外,不同发酵时间的RM均表现出良好且稳定的抗氧化能力,即它们具有良好的DPPH自由基清除活性和ABTS自由基清除活性,且呈剂量依赖性,并且这两种自由基清除活性的IC50值没有显著性差异。以上结果表明,在肠道中RM中的酚类物质发生一定程度的变化,但抗氧化能力稳定,能有效发挥肠道保护作用。综上,盐肤木果实对小肠结肠炎具有良好的预防效果,可作为天然物质开发功能食品,提供一种预防和/或减轻小肠结肠炎的辅助饮食疗法。
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