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研究背景及目的：动脉粥样硬化性心血管疾病是全球发病率和死亡率居首位的疾病。大量的证据表明炎症和免疫反应在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发生发展中有举足轻重的作用，从脂纹的形成到最终急性冠脉综合征(acute coronarysyndromes,ACS)的发生。小分子RNA(MicroRNAs,miRNAs)已被证明参与炎症和免疫反应。 miRNAs是长度为18-22个核苷酸的非编码RNA分子，通过抑制蛋白翻译或引起mRNA降解，从而在转录后水平调控基因的表达。在众多的miRNA，炎症相关的miRNA microRNA-155(miR-155)已被发现参与动脉粥样硬化。目前认为AS为体内外多种因素综合作用的结果，凋亡的增加为其中的因素之一，而凋亡增加确切的分子机制尚不明确。巨噬细胞凋亡已被证实为进展期动脉粥样硬化斑块的一个突出特点。进展期动脉粥样硬化病变的大量病理研究提示：巨噬细胞凋亡和大的坏死核心密切相关，并最终促进斑块破裂和急性血管事件。氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,OxLDL)是一个重要的动脉粥样硬化致病因子，也是一个潜在的细胞凋亡诱导剂。以前的研究已经表明，OxLDL诱导了多种组织和细胞的凋亡，包括内皮细胞，平滑肌细胞和巨噬细胞。一个由死亡受体家族，主要涉及Fas/FasL的信号和下游的caspase-3，介导的外源性凋亡途径，已被认为是OxLDL介导的细胞凋亡的机制之一。由于巨噬细胞凋亡在动脉粥样硬化和斑块不稳定中起着重要作用，细胞凋亡的调节可对进展期动脉粥样硬化斑块破裂提供显著的保护。越来越多的证据表明，细胞凋亡可由miRNA调控。作为一个多功能的miRNA，miR-155被证实参与免疫反应和细胞凋亡通路的调节。miR-155和动脉粥样硬化疾病的进展之间的关系目前还不清楚。这项研究首先旨在研究miR-155与冠状动脉狭窄病变的严重程度及斑块稳定性的关系。此外，鉴于其在凋亡途径中的重要作用，我们推测miR-155在OxLDL诱导的巨噬细胞凋亡中扮演重要角色。因此，本研究的主要目的是为了证明miR-155在OxLDL诱导的巨噬细胞凋亡中的作用及其具体机制。研究方法：(1)我们收集了110例疑似冠心病(coronary heart disease,CHD)患者，行冠状动脉CTA及冠状动脉造影检查冠脉病变情况，根据冠状动脉造影结果进行Gensini评分，评估冠状动脉狭窄病变的严重程度和范围；根据冠状动脉CTA评估斑块稳定性采用实时定量PCR方法检测了新鲜分离的外周血单个核细胞(peripheral bloodmonouclear cell,PBMCs)和血浆中miR-155的表达。(2)用不同浓度及时间梯度的OxLDL处理RAW264.7细胞，采用实时定量PCR方法检测miR-155的表达水平。(3)miR-155的模拟物，miR-155的抑制剂和阴性对照被瞬时转染入RAW264.7细胞或HEK-293细胞以实现miR-155的表达水平的上调或下调。或FADD表达载体被用来感染RAW264.7细胞以实现FADD表达水平的上调。(4)我们采用细胞活力实验(细胞计数试剂盒-8)检测oxLDL处理过的RAW264.7细胞的活力。(5)采用TUNEL法、双染色流式法(Annexin V/PI)和caspase-3的活化片段(17kDa)的蛋白表达等方法评估巨噬细胞凋亡。(6)采用生物信息学技术预测miR-155的潜在靶标。(7)采用荧光素酶实验来验证假定的miR-155靶标。(8)免疫印迹法(WB)用于检测caspase-3和FADD的蛋白表达水平。研究结果：(1)56例冠心病患者PBMCs及血浆中miR-155的表达水平明显低于54例非冠心病患者(P <0.01)。(2)不稳定性心绞痛组(unstable angina pectoris, UAP,n=31)和急性心梗组(acute myocardial infarction,AMI,n=24)患者PBMCs及血浆中miR-155的水平明显低于胸痛综合征组(chest pain syndrome,CPS，n=31)组，而稳定性心绞痛组(stable angina pectoris,SAP，n=24)和CPS组患者之间无统计学差异。(3)Spearman相关分析表明，血浆中miR-155的表达水平与PBMCs中miR-155的表达水平呈正相关(4)有2支或大于等于3支病变血管患者的miR-155水平明显低于0和1支病变血管的患者。0支和1支病变血管的患者之间miR-155的水平没有显着差异。(5)miR-155水平与Gensini积分呈负相关(r=-0.663，P <0.001)。(6)软斑块组miR-155的表达水平较纤维斑块组及钙化斑块组降低(P<0.05)。(7)miR-155的表达水平与年龄(r=-0.227)、高血压(R=-0.440)、总胆固醇(R=0.239)、高密度脂蛋白(HDL)胆固醇(R=0.280)、低密度脂蛋白(LDL)胆固醇(r=-0.315)、吸烟(R=-0.363)、血管紧张素转换酶抑制剂(R=-0.250)、他汀类药物(r=-0.368)，高敏C-反应蛋白(hs-CRP)(r=-0.515)等相关。(8)OxLDL以剂量和时间依赖方式增加RAW264.7细胞中miR-155的表达。(9)OxLDL能显著增加RAW264.7细胞凋亡，miR-155模拟物能抑制此作用，而miR-155的拮抗剂能抵消miR-155的抗凋亡作用。(10)生物信息学分析显示FADD可能为miR-155的直接靶标。(11)萤光素酶报告基因检测和WB实验进一步证实miR-155直接通过作用于FADD的3’-UTR区域从而抑制FADD表达。(12)miR-155抑制oxLDL诱导的细胞凋亡，但FADD过表达限制了miR-155的抗凋亡活性。研究结论：miR-155的表达水平与复杂的致动脉粥样硬化的代谢危险因素、冠状动脉狭窄病变的严重程度(由Gensini积分评估)、斑块稳定性(由冠脉CTA评估)呈负相关，提示miR-155在动脉粥样硬化进展中起保护作用。此外，我们的研究结果表明，miR-155通过作用于其靶标FADD，抑制oxLDL诱导的RAW264.7细胞凋亡，可望提供一种新的动脉粥样硬化的治疗方式。