CD105、CD133在人肝癌细胞株HepG-2的表达情况及生物学性状的体外研究

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背景肿瘤的消退或缓解程度是评价肿瘤治疗疗效的一般衡量标准。目前肿瘤治疗的近期疗效虽能达到消退或缓解,但肿瘤复发成为影响肿瘤患者预后的最重要因素,这也是肿瘤患者5年生存率低的主要原因。而肿瘤干细胞的引入在肿瘤的诊断治疗等方面具有深远意义。肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSC)学说认为肿瘤细胞起源于组织中的干细胞,其核心内容是:肿瘤是由一异质性的肿瘤细胞群构成,其中仅有少数的细胞可以自我更新、具有无限的增值能力和多向分化潜能,是肿瘤的起始细胞并维持肿瘤的持续生长,其余大部分的肿瘤细胞只具有相对的增殖和分化能力。肿瘤干细胞在肿瘤的发生、进展、转移和复发中起关键作用,是肿瘤治疗的核心所在。在肿瘤的发生进展及转移过程中,肿瘤干细胞扮演了至关重要的角色。筛选准确可靠的分子标志物成为肿瘤干细胞领域研究的重中之重。随着肿瘤干细胞研究的深入,越来越多的肿瘤干细胞被分离、鉴定。目前亦不断有研究证实人原发性肝癌(HCC)中存在肿瘤干细胞,但HCC中CSC的分子标志物仍未达成统一看法。因此,找到真正的肝癌干细胞对于肝癌的诊断治疗意义重大。现阶段,肝癌干细胞的研究仍处于探索阶段。研究较多集中于CD133、CD44、CD90、SP干细胞等。CD133作为直肠癌干细胞被广泛研究。后来发现,CD133+肝癌细胞也表现出干细胞特性。另一种肝癌细胞膜表面蛋白-CD105,参与了新生血管生成过程,与肝癌的转移密切相关。目的本研究比较了体外条件下人肝癌细胞株HepG-2膜表面CD105、CD133的表达情况及各亚群间生物学性状的差异,并初步探讨CD105+CD133+HepG-2细胞亚群的干细胞特性。方法采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养HepG-2细胞;流式细胞分选仪检测CD105、CD133表达情况并分选出CD105+CD133+、CD105-CD133+、CD105+CD133-、CD105-CD133-亚群;用CCK-8每日检测上述分选获得的各细胞亚群及未分选HepG-2细胞的OD450值,以比较各亚群细胞增殖能力;软琼脂克隆培养试验比较各亚群细胞成球能力;Transwell侵袭实验比较各亚群细胞的侵袭能力。结果四种人原发性肝癌细胞株HepG-2细胞亚群CD105+CD133+、CD105-CD133+、CD105+CD133-、CD105-CD133-的比例分别为0.2%,0.03%,99.57%和0.2%。CCK-8检测结果显示CD133+亚群OD450值与CD133-亚群之间差异有统计学意义(P<0.05),而CD105-CD133+和CD105+CD133+亚群之间无统计学差异,CD105+CD133-和CD105-CD133-亚群之间亦无统计学差异;软琼脂克隆培养得到的克隆数CD133+亚群与CD133-亚群之间有统计学差异(P<0.05),且CD133+亚群形成克隆数多于CD133-亚群;Transwell侵袭试验结果显示CD105+亚群的穿膜细胞数大于CD105-亚群,两者有统计学差异(P<0.05)。结论本研究发现,CD105在人肝癌细胞株HepG-2的表达与其侵袭能力有关,CD133与其增殖成球能力有关。CD105+CD133+亚群在人原发性肝癌细胞株HepG-2中具有干细胞特性。
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