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对采自中国东北佳木斯、大庆等地区具有典型马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)症状的薯块样品进行往返电泳(R-PAGE),确定含马铃薯纺锤块茎类病毒的阳性样品。利用R-PAGE进行PSTVd检测,灵敏度可达到13ng。同时,利用双向电泳和RT-PCR方法进行类病毒鉴定,证明两种方法均可用来检测类病毒。 利用含PSTVd单体的pGEM-7Z质粒,通过PCR扩增技术,用生物素标记制备cDNA探针,进行杂交反应检测PSTVd,其中通过化学颜色反应进行判读灵敏度可达到50pg,而用化学发光反应进行判读灵敏度可达到5pg,分别是R-PAGE检测灵敏度的260倍和26倍。且两种反应特异性和专化性较强。cDNA核酸斑点杂交反应(NASH)检测PSTVd方法准确、灵敏度高,一次检测样品数量多,且对于异地样品检测非常方便,是以往其它检测方法的有效补充。 利用RT-PGR技术,设计一对引物,对田间采集的经鉴定含PSTVd的阳性样品进行全序列扩增,并将所得产物纯化回收,连接到pMD 18T-vector中,并转化至大肠杆菌JM109中,挑选白斑进行双酶切(Sac I/EcoR V)鉴定证明插入片段为359bp大小,进行序列测定,所得克隆基因为PSTVd全序列负链,大小为359bp。该中国株系和北美弱株系序列相同,同源性100%,因此判断田间发病的为PSTVd弱株系。从而进一步推测中国PSTVd的发生可能是随着Irish Cobbher品种引入我国而带来的。该中国分离株系与印度弱系和美国Wisconsin弱株系在中央保守区有差异,而同PSTVd-I-India中间株系、PSTVd-F-SL强系、PSTVd S27-I-8强系在致病区、保守区和可变区等多处有差异。 本研究对马铃薯类病毒(PSTVd)病原鉴定方法进行系统研究,并制备出专化性和特异性强、灵敏度高的cDNA探针,建立了完整的PSTVd鉴定体系和操作流程。在国内,首次对中国分离株系进行cDNA基因克隆和序列分析,进一步验证了中国株系的由来及其结构特点,对于中国在PSTVd检测水平的提高、检测试剂盒制备、PSTVd的防治及其致病机理、转基因育种等提供重要依据。