鹅副黏病毒病是由鹅源副黏病毒(Goose Paramyxovirus，GPMV)引起的鹅的一种急性、烈性传染病，具有较高的发病率和死亡率，给养鹅业带来了严重的危害。 目前，临床上对GPMV感染尚无特效的治疗药物，接种疫苗是预防和控制该病发生的主要手段。应用传统的活疫苗和油乳灭活疫苗不能产生足够的免疫保护。灭活疫苗免疫不能诱导细胞毒性 T 细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)的产生。CTL是有效的免疫效应细胞，在抗病毒中起着重要的作用。随着分子生物学等相关技术的发展，如何利用基因工程技术生产基因工程疫苗来预防和控制该病成为一项迫在眉睫的问题。 鹅源副黏病毒研究表明，GPMV为有囊膜单链负股不分节段RNA病毒，由6种结构蛋白质组成：NP(核衣壳蛋白)、P(磷蛋白)、M(基质蛋白)、F(融合蛋白)、HN(血凝素.神经氨酸酶蛋白)、L(高分子量的RNA聚合酶)，其中，F蛋白和HN蛋白是该病毒的主要保护性抗原。因此，构建含有主要保护性抗原基因F或HN基因的真核表达载体，对预防该病具有重要意义。 本研究根据GenBank中发表的GPMV HN基因的开放阅读框架(openreading fram,ORF)序列，设计合成一对特异性引物。从鹅源副黏病病死的鹅体内分离到GPMV(命名为GPMV JAU04株)，接种9日龄SPF鸡胚，待24小时后获取死亡鸡胚的尿囊液，检测病毒液的血凝集效价为2<8>。利用 TRIZOL 法提取病毒的RNA，用RT-PCR方法成功的扩增了该病毒的主要保护性抗原HN基因。将扩增片段连接于pMD-18T载体，转化到感受态大肠杆菌 JM-109中，大量培养，提取质粒，通过限制性内切酶及PCR的方法筛选阳性重组质粒，再进行序列测定(GenBank登陆号为EF141104)。序列分析结果表明，GPMV JAU04分离株HN基因由ATG到TAA共1 716个核苷酸，编码571个氨基酸，有5个潜在的糖基化位点，12个保守的半胱氨酸(Cys)残基。与国内所发表的鹅源副黏病毒和其他国内外参考标准强弱毒株的同源性为81.9％～99.4％，推导氨基酸的同源性为88.6％～98.8％。分别用限制性内切酶Kpn Ⅰ和HindⅢ酶切pMD-18HN和真核表达载体pVAXI，将纯化回收的HN基因成功克隆入带有粘性末端的真核表达载体pVAXI，构建了含有HN基因的真核表达载体pVAXI-HN。通过脂质体法把pVAXI-HN转染入Vero细胞进行真核表达。经过细胞的培养，提取细胞的总RNA，反转录成cDNA。以cDNA为模板，以P1/P2为引物，在mRNA水平PCR扩增HN基因，以检测外源目的基因转录情况。同时利用免疫荧光技术，对真核重组质粒pVAXI-HN在Vero细胞中表达的蛋白表达进行直接免疫荧光检测。结果表明，RT-PCR 结果在1 000-2 000bp之间可见DNA条带；直接免疫荧光法对表达蛋白进行检测，可见明亮的荧光。由此说明，本实验构建的pVAXI-HN真核表达质粒能在真核细胞中高表达，为进一步开发和研制GPMV核酸疫苗奠定了基础。