烟草土传病害是由病原物侵染烟草根、茎部而引起的一类病害,目前该病害的主要防治措施是喷施化学农药,虽然取得了一定效果,却引起了农残超标与环境污染等问题。为减少化学农药施用量,保持现代烟草行业可持续发展,本研究利用二次发酵原理,将有益微生物、新鲜羊粪及风化煤,按照一定比例进行堆肥发酵,制备出一种微生态制剂,于洛阳市宜阳县高乡石村设置不同施肥量为处理进行大田试验,探讨微生态制剂对烟草不同生育期根围土壤微生物数量、酶活性及农艺性状的影响;采用Illumina Miseq测序技术分析微生态制剂对烟株根围土壤微生物多样性、群落结构及功能的影响。主要研究结果如下。微生态制剂制备工艺过程为新鲜羊粪一次发酵含水量约30%,添加1‰发酵菌剂,发酵周期为18 d,翻堆次数为3 d一次;将腐熟羊粪与风化煤(3:2)混合制作成含水量约30%的基料。室内固体菌种制备以生物原液5%混入基料,细菌、真菌、放线菌固体菌种发酵周期分别为3～5 d、5～7 d、7～9 d;固体菌种扩大生产以固体菌种15%与基料混合,发酵周期为6 d,翻堆次数为3 d一次。微生态菌剂制备以混合固体菌种15%与基料混合,二次发酵周期为6 d,翻堆次数为2 d一次。3类固体菌种的p H值(6.83～7.61)、氯离子含量(0.45%～0.60%)均符合国家标准,细菌固体菌种中的活菌数(6.28×10~8CFU/g)符合国家标准,有益细菌较真菌(1.10×10~7CFU/g)与放线菌(6.00×10~6CFU/g)更容易在发酵基料上定殖。微生态制剂产品无异味,对烟草幼苗生长无影响,在含水量30%以内,所测指标均符合生物有机肥国家标准。每667m~2烟田施用200Kg、300Kg、400Kg微生态制剂均能增加烟草团棵期根围土壤可培养的微生物菌落数量、提高土壤酶活性、改善农艺性状,与对照组相比其细菌数量分别增加了123.47%、338.78%和257.14%;真菌数量分别增加了116.54%、793.98%和664.66%;放线菌数量分别增加了62.88%、222.72%和66.66%;脲酶活性提高了27.27%、9.09%、22.73%;磷酸酶活性提高了159.12%、381.39%和552.92%;过氧化氢酶活性提高了1.63%、9.03%和14.05%;株高增加了6.75%、15.61%和16.93%;茎围增加了1.47%、2.65%和6.49%;叶片数增加了1.38%、8.30%和4.32%;叶面积增加了4.62%、9.46%和3.97%。微生态制剂能够增加烟草团棵期和旺长期根围土壤原核生物属种类,显著提高烟草旺长期芽孢杆菌属和链霉菌属含量,降低烟草三个时期根围土壤真核生物属种类。微生态制剂对烟草根围土壤原核生物群落结构影响不大,但可以改变烟草三个生育期根围土壤中微生物群落功能的组成。本研究依据微生物二次发酵原理,研制和试生产了一种含有益微生物菌群的微生态制剂。通过大田试验测定了该制剂对烟株农艺性状及烟株根围土壤微生物与酶活性的影响;并在微观水平探究了该制剂对微生物多样性、群落结构及功能的影响,为微生态制剂在洛阳烟叶生产中的推广应用奠定了一定的理论和实践基础。