紫阳绿茶多酚提取物高效液相色谱指纹图谱研究

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陕西紫阳富硒茶是国家地理标志保护产品,其因富含硒元素而得名,不但有茶的功能和营养作用,还有补硒功效。因而市场中会有以次充好、假冒伪劣等现象发生,给正规茶叶的消费和出口贸易造成不良影响。目前,茶叶品质的鉴定主要是测定一些常规理化指标以及茶叶中几种主要特征成分的含量,并结合茶师的感官审评来进行的,具有一定的局限性,不能全面而客观地反映茶叶的质量。茶叶化学指纹图谱,是指茶叶经适当处理后,采用一定的分析手段,得到能够标示该类茶叶特性的色谱图及数据库,为茶叶品质鉴定做出可量化的评价,弥补感官评价的不足,可用来评价和控制茶叶及其提取物的质量。本试验以陕西紫阳绿茶为原料,建立了紫阳绿茶多酚提取物的HPLC指纹图谱,并对其进行相似度评价,以期为紫阳绿茶及其提取物质量评价、地理标志认定与真伪鉴别提供有力的保障和可供参考的质量控制标准。主要研究结果如下:(1)优化了紫阳绿茶多酚的提取工艺。最佳提取工艺条件为:料液比1:25、乙醇浓度50%、浸提温度80℃、浸提时间20min,在此工艺条件下,茶多酚的相对提取率可达97.8%。本试验中选取的四个因素对茶多酚相对提取率的影响顺序为:料液比>乙醇浓度>温度>浸提时间。(2)建立了一种同时测定紫阳绿茶样品中10种多酚组分含量的HPLC分析方法。选定的HPLC色谱条件为:色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18(5μm,4.6×250mm),紫外检测波长278nm,柱温30℃,进样量20μL,流速1mL/min,以甲醇-0.1%三氟乙酸溶液(5:95)为流动相A,甲醇为流动相B,进行梯度洗脱。梯度洗脱程序为:0~10min,0%~19%B;10~20min,19%~22%B;20~30min,22%~28%B;30~35min,28%~35%B;35~40min,35%~35%B;40~50min,35%~65%B;50~60min,65%~0%B。10种多酚组分在此色谱条件下均可得到很好的分离。该方法的精密度高、稳定性及重复性好,10种多酚化合物的最低检测限较低,回收率较高,表明该测定方法可靠。运用该方法测定了10批次来自紫阳县不同茶园的绿茶样品中10种多酚组分的含量,结果表明,儿茶素类是紫阳绿茶样品中的主要成分,EGCG是主要的儿茶素单体,绿原酸和GCG的含量在不同批次之间有显著不同。这些结果说明我们可以通过测定样品中这些多酚组分来成功地监控市售紫阳绿茶的质量。(3)建立了紫阳绿茶多酚提取物HPLC指纹图谱。选定EGCG色谱峰为参照峰,标定了指纹图谱中13个峰为共有指纹峰,构成了紫阳绿茶多酚提取物特有的色谱指纹图谱特征。通过标准品对照鉴定出了其中7个峰,分别为GA、EGC、 EGCG、CAF、EC、GCG和ECG。方法学考察结果表明,该指纹图谱符合国家中药指纹图谱的建立标准。相似度评价结果显示,用于建立HPLC指纹图谱的10批次样品间的相似度均大于0.900,相似度较高,说明所建立的指纹图谱稳定、可靠,可作为紫阳绿茶及其提取物质量评价、地理标志认定与真伪鉴别的重要依据。
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